Ензимна хидролиза на топлинно коагулирания картофен протеин 2
Документи
Препис от ензимна хидролиза на коагулирания от топлината картофен протеин, част 2. Влияещи параметри
Ензимна хидролиза на топлинно коагулирания картофен протеин Част 2. Параметри на влияние *
От Ф. Мителбах, Е. Бергхофер, В. Щайрер и В. Хайн, Виена
За успеха на ензимната хидролиза на топлинно коагулирания ензимен хидролиз на топлинно коагулирания картофен протеин. II. Картофени протеинови продукти, от съществено значение е влиянието на параметрите, определящи реакцията. За намаляване или изключване на някои параметри на изпитване на инхибиращите вещества. Това може да бъде ензимна хидролиза на топлинно коагулирания картофен протеин чрез подбор на подходящи ензимни препарати или чрез използване на изследвани. Намаляване и елиминиране, съответно, влиянието на някои методи за предварително третиране. протеиноподобни инхибитори чрез подбор на специфични ензими или чрез
прилагането на методи за предварителна обработка на бропер е от голямо значение.
Картофеният протеин, получен чрез коагулация под налягане и топлина, е до голяма степен неразтворим [1, 2, 31. Ензимната хидролиза е една от възможностите за подобряване на разтворимостта и други свързани функционални свойства [4]. В продължение на работата, за която вече беше докладвано накратко [5], бяха изследвани различни фактори, влияещи върху ензимното разграждане на картофените протеини.
Картофено протеинов сух продукт от различни години на реколтата е получен чрез коагулация под налягане и топлина и циркулационно сушене:
Съдържание на суров протеин Съдържание на вода Съдържание на сурова пепел (N x 6,25)
1974 78,3% 9,7% 3,4% 1975 77,9% 7,8% 3,0% 1976 8O, O% 8,2% 2,7% 1971 75,2% 6,7% 3, 0% I978 79,2% 7,6% 2,8%
Коагулатът на влажен картофен протеин от 1978 г. се произвежда чрез коагулация под налягане и топлина и се съхранява чрез дълбоко замразяване, докато се използва:
Съдържание на суров протеин Съдържание на вода Съдържание на сурова пепел (N x 6,25)
Търговски препарати от различен произход.
диапазон на рН 5,9 -8,0: Зелен фосфатен буфер с йонна сила I = 0,2:
PH 9.2: универсален буфер съгласно Teorell и Stenhugen;
PH 5, o: Бойд ацетатен буфер, I = 0,2; рН 2,0 или 2,5: Na буфер на цитрат/солна киселина.
3 Метода 3.1 Експериментално устройство за ензимна хидролиза
Ензимното разграждане се извършва в периодични експерименти или с използване на буфери, или съгласно pH-stat техниката. Методология при използване на буферни разтвори: Претеглете 5,0 g субстрат в 250 ml колба с кръгло дъно с NS 29/32, покрийте с 80 g буфер, след добавяне на магнитна бъркалка, затворете колбата, поставете я в 1 "термостатирана водна баня, Под която има магнитна бъркалка, вкарайте и загрейте до желаната температура в рамките на 15 мин. Претеглете необходимото количество ензим в лодка за претегляне, изплакнете ензима в колбата с кръгло дъно, използвайки останалите 15 g буферен разтвор и затворете колбата След определеното време на хидролиза, спрете реакцията, като поставите колбата във вряща водна баня за 20 минути. Охладете колбата до стайна температура под течаща вода. Проведете празен тест за всяка серия без добавяне на ензими. Партидни експерименти, използващи pH-Stat техника, по същество бяха проведени, както в [ 7], както е описано .
3.2 Проследяване на разграждането на протеини
За тази цел се използва главно определянето на разтворимата протеинова фракция (разтворим протеин на базата на общ суров протеин) и, в случая на pH статичната техника, изчисляването на степента на хидролиза от разяждащата консумация [8], но това се отнася само за стойностите на pH 6.5 е възможно.
* Част 1 Starke 32 (1980), 231
Нишесте/Starke 32 (1980) № 11, стр. 369-375 aj Verlag Chemie, GmbH, D-6940 Weinheim 1980 0038-9056/80/1111-0369 $ 02.50/0
Съдържанието на разтворим протеин беше определено по следния метод: Центрифугирайте протеиновата суспензия при около 40 000 g и 2-4 ° C. в продължение на 30 минути. В бистрата супернатанта определете съдържанието на азот според Kjeldahl по обичайния начин и умножете по 6.25, за да получите разтворим Преобразувайте суров протеин.
3.3 Производство на картофена плодова вода (FW) в лабораторен мащаб Измийте 250 - 500 g необелени картофи с чешмяна вода, след това изплакнете с дестилирана вода, подсушете с филтърна хартия и претеглете до 0,1 g. Напълнете запечатващ се събирателен съд (напр. Цилиндрично стъкло от 500 ml с отклоняваща се капачка) за FW с 0,17% K2S20, в зависимост от количеството картофи. Обработвайте картофите възможно най-бързо в сокоизстисквачка Progress тип 609K22. Отстранете пяната и всички части на черупката от повърхността на FW с помощта на лъжица или я изсмучете със стъклена тръба с помощта на водна струя помпа. Центрофугирайте FW при около 40 000 g и 2-4 ° C, излейте супернатантата и измерете обема. Добивът на светложълт FW обикновено е до 50% от количеството използвани картофи.
3.4 Полуколичествено тестване за инхибиторни ефекти чрез дифузия на агарен гел Използва се наличен в търговската мрежа набор от проби, за да се получат агарови гел плаки с казеин като субстрат и рН 7,2 [9]. Плаките с различни стойности на рН се приготвят съгласно Lowenstein и Ingild [lo]. Определянето се извършва както в Takahashi et al. [I I]. В този случай течността или суспензията, която се тества, се добавя в различни количества към стандартна серия с, като правило, четири различни, подходящи ензимни концентрации. Полуколичествената оценка беше извършена върху неоцветени плочи чрез измерване на разликите в съответните диаметри на радиалните зони с и без добавяне на инхибитори .
4 Резултати и дискусия Таблица 1 обобщава възможните влияещи фактори при ензимната хидролиза на картофения протеин. Нашите експерименти се основаваха на определени картофени протеинови продукти (вж. Материал), така че суровината-
Маса 1 . Възможни влияещи фактори при ензимната хидролиза на картофения протеин.
Сорт картофи Качество на клубените Условия на коагулация Чистота на коагулата Условия на сушене Съдържание на инхибитора Предварителна обработка на субстрата Ензимен препарат Съотношение ензим/субстрат Концентрация на субстрата pH стойност Силно йонна температура Време на реакция Инхибиране на субстрата Инхибиране на продукта
и зависимите от процеса influenD променливи могат да се приемат за постоянни.
4.1 Сравнение на различни ентеримни препарати
4.1 .I Сух продукт от картофени протеини като субстрат Ензимите, изброени в таблица 2, бяха използвани при оптималната температура и стойността на рН, посочени от производителя, докато съотношението E/S, концентрацията на субстрата и времето на хидролиза се поддържаха постоянни. Картофено протеинов сух продукт 1974 г. служи като тестов субстрат и казеин за сравнение. От резултатите в таблица 2 може да се види, че при всички ензими в картофения протеин може да се постигне по-ниско, а в повечето случаи дори значително по-ниско разграждане, отколкото при казеин. Причината за това дойде u. а. липса на възможности за атака на ензимите поради структурата на картофения протеин и/или наличието или появата на вещества с инхибиторен ефект, което беше допълнително изследвано (вж. раздели 4.2.2 и 4.3). В резултат на различните дейности на използваните ензими, резултатите, дадени в таблица 2 - за разлика от стойностите в таблица 3 - не позволяват сравнения по отношение на ефективността на ензимните препарати.
Таблица 2. Ензимно разграждане на сух продукт от картофени протеини 1974 г. и казеин с помощта на различни протеази с използване на буферни разтвори (концентрация на субстрата 5%; E/S 0,02; време на хидролиза 3 h).
Стойност на рН Съдържание на протеини на терна (X) температура картоф казеин
Неутрална протеаза от Bac. subtilis Carica папая протеаза Неутрална протеаза от Bac. suhtilis алкална протеаза от Bac. lichenijormis неутрална протеаза от Bac. subtilis Трипсинова киселина Гъбична протеаза от A s p. Saitoi Pepsin Смес от ендо- и екзопептидази от A s p. oryzae алкална протеаза от Bac. subtilis Растителна протеаза Термофилна протеаза от Bac. thermoproteolyticus Rokko, пречистена неутрална протеаза от Bar. subtilis Неутрална гъбична протеаза от Aspergillus sp. Термофилна протеаза от Bac. thermoproreolyticus Rokko