Афинитетна хроматография - Голяма енциклопедия на нефт и газ, статия, страница 3
Афинитетна хроматография
Терминът афинитетна хроматография обаче поражда (и все още продължава да поражда) много възражения. В много случаи обаче не е толкова лесно да се очертае ясна граница между биоспецифичен комплекс и комплекс, образуван в резултат на действието на неспецифични хидрофобни взаимодействия, както може да изглежда на пръв поглед. [31]
Пример е афинитетната хроматография на ацетил холинестераза [16], разгледана в раздел. [33]
Търсенето и разработването на нови неразтворими носители са най-важни за развитието на афинитетна хроматография и обездвижване на ензимите. Разследванията в тази посока са необходими за въвеждането в практиката на методите, които са били използвани по основния начин. Тъй като все още не е създаден носител, който да отговаря напълно на всички изисквания, е необходимо да бъдете много внимателни при избора на носителя и метода на закрепване на лиганда към него, като се вземе предвид възможността за практическото му приложение, тъй като както и икономически съображения. [34]
Заявленията за афинитетна хроматография са много и разнообразни и не се ограничават до изброените по-горе. Следващите раздели дават някои примери, които илюстрират възможностите на афинитетната хроматография. [35]
Специален вариант на афинитетна хроматография е свързан с използването на хелатни сорбенти. Върху матрицата се фиксира хелатиращ агент, след което чрез преминаване на разтвор на съответната сол колоната се зарежда с йони Cu2, Zn2, Co2 и др. Протеините, способни да образуват комплекси с тях, се задържат върху тези йони по време на хроматографията . [36]
Успехът на метода на афинитетна хроматография е свързан със създаването на биоспецифични сорбенти, способни да свързват вещества в разтвор въз основа на взаимодействието на ензим - субстрат, ензим-инхибитор, антиген-антитяло. Потискането на сорбционните свойства на биоспецифичните сорбенти (инактивиране на активни центрове) често се наблюдава, когато веществата се изолират от екстракти или културни течности без предварително пречистване. В това отношение основните успехи на афинитетната хроматография са свързани с подготвителни лабораторни процеси за изолиране на протеини, включително ензими, след използване на предварителните етапи на тяхното пречистване. Мащабирането на тези процеси и многократното използване на биоспецифични сорбенти, особено при работа с многокомпонентни разтвори, поради посочените причини, често срещат определени трудности. [37]