Възможни приложения на поточна цитометрия с използване на FACS - LABOKLIN GMBH; КЛИНИЧНА ЛАБОРАТОРИЯ

Съкращението FACS означава елуоресценцияаактивиран ° Сell сортинг. Това е специална форма на поточна цитометрия, при която клетките, маркирани с флуоресценция, могат да бъдат измерени и анализирани. Клетките текат в поток от течност през лазерен лъч и се определя размерът на клетката, вътрешната структура и относителната интензивност на флуоресценцията. Налични са флуоресцентни антитела, налични за многобройни клетъчни типове, особено лимфоцити, които са насочени срещу имунофенотипните повърхностни характеристики (клъстер на диференциация, съкратено до "CD") на клетките. Тези CD маркери вече могат да се използват за изследване на клетките и за по-тясното им идентифициране. Например цитотоксичните Т-клетъчни лимфоцити са положителни за CD3 и CD8, но отрицателни за CD21 и CD4.

поточна

Този преглед се използва в рутинната диагностика, особено в хематологията. Тъй като тестовият материал трябва да бъде в течна форма, кръвните проби са особено подходящи. За да се осигури значим резултат, е важно клетките да са непокътнати, така че изследването трябва да се извърши възможно най-скоро, в рамките на максимум 3 дни. В LABOKLIN устройството FACS се използва за различни важни изследвания.

1. Тромбоцитни антитела

Повишеният имуноглобулин (предимно IgG) на повърхността на тромбоцитите води до преждевременна фагоцитоза на тромбоцитите от макрофаги с последствие от тромбоцитопения. Тази имуно-медиирана тромбоцитопения (IMT) може да бъде първична или вторична. Рядката първична форма се причинява от автоантитела, които са насочени срещу специфичните за тромбоцитите епитопи. Вторичната имуно-медиирана тромбоцитопения, от друга страна, е свързана с различни лекарства, инфекциозни агенти (бактерии, вируси, протозои или хеминти), неоплазия и други имуно-медиирани заболявания.

Първичен IMT се наблюдава предимно при кучета, два пъти по-често при женски, отколкото при мъжки кучета, във всички възрастови групи, но най-често при животни на средна възраст. Предразположени породи са кокер шпаньол, миниатюрен и играчка пудел, староанглийско овчарско куче (бобтейл), златен ретривър и немско овчарско куче.
Измереният брой тромбоцити обикновено е по-малък от 30 G/l при първичната IMT, отколкото при вторичната форма.

Диагностиката може да се извърши с помощта на FACS, като се използва антитромбоцитно откриване на антитела. Провежда се двойна инкубация за откриване на IgG, свързан с тромбоцитите. Нивото на антителата от 30% се оценява като положително доказателство за IMT. Материалът на пробата (пълноценна EDTA) не трябва да е по-стар от 3 дни, за да се постигне оценим имунооцветяване. Изследването трябва да започне преди започване на имуносупресивна терапия, в противен случай ще се получат фалшиво отрицателни резултати. Допълнителни диагностични възможности са диагностичната терапия с кортизон и откриването на мегакариоцитна хиперплазия в костния мозък.

2. Клетъчен имунен статус

Клетъчният имунен статус включва пълна кръвна картина, както и определянето на относителния и абсолютен брой периферни лимфоцити: В клетки, общо Т клетки, както и CD4 + (Т помощни клетки) и CD8 + клетки (цитотоксични Т клетки).

Имунофенотипизирането на кръвта се основава на селективното разпознаване на антигени на клетъчната повърхност чрез флуоресцентни маркирани с багрило моноклонални антитела, използващи поточна цитометрия (FACS). Изследването на клетъчния имунен статус е показано, ако клиничните симптоми предполагат първично или вторично нарушение в клетъчната имунна система.

При кучета установяването на имунен статус може да бъде полезно при диагностицирането на пиодермия, демодекоза, системен лупус еритематозус и лайшманиоза и вродени дефекти на Т-клетките. Последващи прегледи могат да се използват в лекарствената терапия за контрол и корекция на дозата.
При конете се използва за изясняване на чести и продължителни инфекции.

Определянето на имунния статус играе специална роля при инфекцията с котешки имунодефицитен вирус (FIV).

Вирусът причинява хронични, персистиращи инфекции с прогресиращ ход на заболяването. Инфекцията на имунокомпетентни клетки постепенно изтощава имунната система.

Вирусът показва подчертан тропизъм за Т лимфоцити и макрофаги. Функциите на Т лимфоцитите са засегнати главно от увреждането, като преобладават количествените и качествени дефекти в популацията на Т хелперни клетки. Първо, увеличаването на CD8 + клетките води до процентно намаляване на броя на CD4 + клетките. Броят на CD8 + клетките остава увеличен през асимптоматичния период на инфекцията и намалява сравнително малко преди да се развият клиничните симптоми. В началото на инфекцията се заразяват главно CD4 + клетки; тук се откриват най-големите количества вирус. С напредването на инфекцията абсолютен спад в CD4 + клетките води до намаляване на коефициента на CD4 +/CD8 +.

Хуморалната имунна защита показва увреждане на нейната функция относително късно. Намаляването на броя на В клетките обикновено се случва само в последния етап. Количеството на вируса в кръвта отново се увеличава значително, но отговорът на антитела вече не се осъществява.

Следователно създаването на имунен статус може да осигури оценка на прогнозата при наличие на първичен или вторичен имунен дефицит.

3. Диференциация на левкемия

При лимфоцитоза> 30 G/l или лимфопролиферативно заболяване (левкемия, лимфом етап V), потвърдено чрез тест за клоналност (PARR) с минимален брой на левкоцитите> 5 G/l, може да се извърши диференциация на левкемия с помощта на FACS. Използвайки CD маркерите за идентифициране на клетките, това изследване може да се използва за класифициране на остра или хронична левкемия (CD34: маркер на стволови клетки), което може да предостави важна информация за прогнозата и избора на терапия. Освен това неопластичните клетки могат да бъдат разделени на В-клетки и Т-клетъчни лимфоцити и подтипове.