Структура разделяне на макромолекули киселина амин уроци за електрофореза Преподаване и

1. Смес от следните аминокиселини се подлага на хартиена електрофореза при рН 3.9: A, S, F, L, R, D, H. Кои аминокиселини мигрират към анода? Кои аминокиселини мигрират към катода ?

2. Защо аминокиселините с един и същ заряд се отделят съвсем леко по време на електрофореза (пример: Gly срещу Leu) ?

3. Помислете за сместа от аминокиселини A, V, E, K, T при pH 6. Какъв е профилът на миграция след електрофореза на хартия? Посочете местоположението на отлагането, анода, катода и всички неразделени аминокиселини. Кой продукт помага за разкриване на аминокиселини ?

Принцип и използване на електрофорезата

Целта на електрофорезата е да отдели заредените молекули през гел (полимер) под въздействието на електрическо поле .

Молекулите се движат към полюса на заряда, противоположен на нетния им заряд z, със скорост v, пропорционална на този заряд: v = E. z/f

  • E е силата на електрическото поле
  • f е силата на триене

Следователно електрофоретичното разделяне се извършва според съотношението [заряд/маса] .

Електрофоретичната подвижност на молекулата може да бъде изразена (по опростен начин) чрез съотношението: подвижност = k. (pH - pI)/моларна маса

където pI е изоелектричната точка на молекулата.

Помислете за протеин с pI = 5:

  • ако рН на буфера, използван за хроматографията, е по-ниско от pI на протеина (синя зона - фигура по-долу), последният се зарежда положително: трябва да се използва катионен обменник
  • ако рН на буфера, използван за хроматография, е по-голямо от pI на протеина (червена зона), последният се зарежда отрицателно: трябва да се използва анионообменник.

разделяне

Електрофорезата позволява, наред с други неща, да:

Въпрос 1. В случай на смес от аминокиселини (A, S, F, L, R, D, H.), подложена на електрофореза върху хартия при pH 3,9:
Аминокиселина pI зареждане при pH 3,9 посока на миграцията
AT 6 + катод
С 5.7 + катод
F 5.5 + катод
L 6 + катод
R 10.8 +++ катод
д 2.9 - анод
З. 7.6 ++ катод
Забележка: в зависимост от източника стойностите на pI или pKa се различават леко.