Протеинов етикет - Биология

Кога Протеинов ден, Етикет за афинитет или етикет за епитоп. Ден за „маркиране“, „етикет“ или „етикет“) се използват в биохимията за описване на различни, предимно кратки, аминокиселинни последователности, които могат да се използват за маркиране на протеини. Маркираните протеини принадлежат към слетите протеини.

Лексикон биологията

Приложения

Различните маркировки са подходящи за различни цели. Те се използват в процеса на проектиране на протеини при генерирането на рекомбинантни протеини или тяхното пречистване и откриване чрез афинитетна хроматография, изтеглящи тестове, Western blot, имунохистохимия, флуоресцентна микроскопия или образи на живо.

За да се генерира протеинов маркер, кодиращата ДНК последователност на протеиновия маркер се вмъква в кодиращата ДНК последователност на слетия протеин зад началния кодон или пред стоп кодона, като същевременно се поддържа рамката за четене. Това създава N-краен или C-краен протеинов маркер върху протеина по време на транслацията.

Понякога протеиновият етикет трябва да се отстрани от протеина след почистване, напр. Б. може да бъде постигнато чрез място на разцепване на протеаза или индуцируем интеин. Базираният на протеолиза подход използва протеази с по-дълга последователност на разпознаване, които се режат само на границата на протеиновия маркер, напр. Б. на TEV-Протеаза. [1] Inteins може да бъде предизвикан от тиоли или чрез понижаване на стойността на pH. [2] [3] [4]

Някои маркери имат и други функции освен свързване на антитяло или имуноконюгат, като:

  • Имуноафинитетно хроматографско пречистване (всички със съответните антитела)
  • Детекция въз основа на антитела (за всички, например чрез Western blot, имунохистохимия или имунофлуоресценция)
  • Афинитетна хроматография въз основа на афинитета към друг свързващ партньор (напр. CaM етикет, CBP етикет, GST етикет, MBP етикет)
  • Места за биотинилиране за пречистване със стрептавидин (напр. Avi-Tag, BCCP-Tag, Strep-Tag)
  • Сложно образуване с двувалентни никелови йони и модифицирана нитрилотриоцетна киселина и омрежена агароза или декстран (напр. His-Tag)
  • Флуоресценция (напр. GFP или флаг)
  • По-лесно разделяне в HPLC поради повишената полярност (напр. His-Tag, FLAG-Tag, Xpress-Tag)
  • Цистеини като реактивни групи (напр. GST маркер, щракващ маркер, тиоредоксинов маркер)
  • Повишаване на разтворимостта Приобщаващи органи, с по-големи тагове (напр. GST тагове, MBP маркери)
  • Подобряване на сгъването на протеини Приобщаващи органи или поради неправилно свързани дисулфидни мостове (например тиоредоксинов маркер, поли (NANP) маркер)
  • индуцируеми реакции на утаяване [5] [6]