Prot; ines

Протеин. Пречистване (Упражнения)

The пречистване на протеини включва няколко техники в хроматография, утаяване на сол, електрофореза, центрофугиране.

Въпрос 1.
Какви са причините за използване на утаяване на амониев сулфат като начален етап на пречистване на протеина?
(Отговор 1)

Отговори. Подробности Отговор за Q1 (Въпрос 1)
Утаяването на амониев сулфат (фракциониране чрез амониев сулфат, осоляване) използва критерия за разтворимост на протеини. Това дава възможност за концентриране на протеина, който представлява интерес, чрез утаяване по неспецифичен начин на общо голяма част от протеините, съдържащи се в общия екстракт. Получава се суров екстракт (частично пречистване) на протеина, който след това може да претърпи допълнителни етапи на пречистване.

Отговори. Подробности (продължение) Отговор за Q2 (Въпрос 2)
За да се елуират протеини, свързани с йонообменна смола, се предлагат две възможности: 1/използвайте градиент на рН или сол (обикновено NaCl). Ако изберем използването на NaCl градиент, обикновено започваме с буфер с ниска йонна сила, последван от поредица от буфери, чиято концентрация на NaCl постепенно се увеличава (може да се използва непрекъснат градиент). Йони Na ​​+ или Cl отделят протеините от колоната, като неутрализират отрицателните или положителните заряди, които позволяват на протеините да взаимодействат със смолата. Резултатът е елуирането на протеините според тяхната плътност на заряда. Всъщност, за да се отделят от катионообменната колона (CM-целулоза), протеините с по-малко положителни заряди ще изискват по-малко Cl-йони (следователно по-ниска концентрация на NaCl), за да неутрализират своите заряди, отколкото протеините с по-положителни заряди. Същата логика се отнася за Na + йони по време на елуирането на протеини, прикрепени към анионообменна смола (DEAE-целулоза).

концентрация NaCl

В случая на това упражнение можем да заключим, че:
- миоглобинът ще се елуира първо, тъй като няма да се прикрепи към колоната (pH

- pI на уреаза (5.4) е по-близо до pH на буфера, отколкото pI на овалбумин (4.6): следователно уреазата ще има по-малко отрицателен общ нетен заряд от овалбумина. Следователно можем да прогнозираме, че уреазата ще се елуира с по-ниска концентрация на NaCl от необходимата за елуиране на овалбумина.