Прочетете Хистология

  • ЖАНР
  • АВТОРИ
  • КНИГИ 563 765
  • СЕРИЯ
  • ПОТРЕБИТЕЛИ 510 019

Методът на диференциално центрофугиране е изследване на отделни органели или дори техните фрагменти, изолирани от клетката. За това парче от изследвания орган се втрива, пълни с физиологичен разтвор и след това се диспергира в центрофуга с различни скорости (от 2 до 150 хиляди в минута). В резултат на центрофугирането се получават интересуващите фракции, които след това се изследват по различни методи.

Морфометричните методи са количествени методи. Те правят възможно определянето на размера и обема на ядрото - кариометрия, клетките - цитометрия, органелите - електронна морфометрия, както и определянето на броя на клетките от различни популации и субпопулации. Тези методи се използват широко в научните изследвания.

Различни експериментални методи - зареждане с храна и вода, физически методи (UHF, микровълнова печка, лазери, магнити). Те се използват за изследване на реакцията на структури от интерес за определен ефект и се комбинират с методите на морфометрията, цито- и хистохимията. Тези методи се използват и при научни изследвания.

По този начин микроскопията е основният и най-разпространен метод за изследване в хистологията. Приготвянето на хистологичен образец включва следните стъпки.

един. Вземане на материал - парче тъкан или орган. Когато вземате материал, трябва да се спазват следните правила:

1) вземането на проби от материал трябва да се извърши възможно най-рано след смъртта или клането на животното, по възможност от жив обект, за да се запази възможно най-добре структурата на изследваните клетки;

2) вземането на проби от материал трябва да се извършва с остър инструмент, за да не се нарани тъканта;

3) дебелината на парчето не трябва да надвишава 5 mm, така че фиксиращият разтвор да може да проникне през цялата дълбочина на тъканта;

4) наложително е да се маркира парчето, като се посочи името на органа, номера на животното или фамилията на лицето, датата на събиране.

2. Фиксиране на материала. Този етап се провежда, за да спре метаболитните процеси в клетката и да я предпази от разпадане. За това парче тъкан, взето за изследване, се потапя във фиксиращ разтвор. Решението може да бъде просто (алкохол или формалин) и сложно (разтвор на Carnois, фиксатор на Zinker). Фиксаторът причинява денатурация на протеини и поддържа структурата на клетките в състояние, близко до живота. Фиксирането може да се извърши и чрез замразяване - охлаждане с течен азот или струя въглероден диоксид.

3. Изливане на парчета плат в уплътняваща среда (парафин, смола) - или замразяване. Този етап е необходим, за да се направи впоследствие тънък участък от изследваната тъкан.

4. Приготвяне на филийки върху микротом или ултрамикротом с помощта на специални ножове. След това секциите за светлинна микроскопия се залепват върху стъклени стъкла, а за електронна микроскопия се монтират върху специални мрежи.

пет. Оцветяване на секции или тяхното контрастиране (за електронна микроскопия). Преди да оцветите секциите, е необходимо да премахнете уплътняващата среда - девакс. С помощта на оцветяване се постига контрастът на изследваните структури. Оцветителите могат да бъдат класифицирани като основни, киселинни и неутрални. Най-широко използвани са основни багрила (хематоксилин) и киселинни (еозин). Често се използват сложни багрила.

6. Изясняване на участъци в ксилен и толуен. Те са затворени в смоли (балсам и полистирол) и покрити с капак.