Предотвратяване на лептинова резистентност чрез блокиране на ангиотензин II (AT 1) рецепторите в рамката
1 От Института за експериментална и клинична фармакология и токсикология към университета в Любек Директор: проф. Д-р. мед. Markus Schwaninger Предотвратяване на лептинова резистентност чрез блокиране на рецепторите за ангиотензин II (AT 1) в контекста на диета, предизвикано от затлъстяване при плъхове Инаугурационна дисертация за получаване на докторска степен от Университета в Любек - От секция „Медицина“ - представена от Margot Lau, geb. Thermann от Любек Любек 2012
2 първи репортер: проф. Д-р обратно нат. Валтер Рааш 2-ри репортер: проф. Д-р мед. Д. Лудвиг 3. Докладчик: проф. Д-р мед. P. Gohlke Ден на устния изпит: Одобрен за печат: Lübeck, докторската комисия на лекарската секция
3 - За моите скъпи родители-
4 Съдържание Съдържание Съдържание Въведение Инсулинова резистентност Затлъстяване Ренин-ангиотензин-алдостеронова система (RAAS) Материал и методи Тестови протоколи Изпитване на животни Изследване на лептинова чувствителност при Телмисартан Изследване на толерантността към глюкоза при продължително хранене с диета от кафетерията Приготвяне на разтвори Инсулинов разтвор Лептинов разтвор или лекарствен разтвор Приложение на телмисартан Вещества Интраперитонеално приложение Перорално приложение Подкожно приложение Екстракция на материали Антикоагуланти и стабилизатори Вземане на кръв от опашката Убиване и отстраняване на органи Функционални тестове Плетизмографско измерване на кръвното налягане Измерване на активността Тест за устойчивост на глюкоза (OGTT)
5 Съдържание Тест за инсулинова толерантност (ITT) Биохимични анализи Радиоимуноанализ (RIA) Подготовка на хипоталамите Екстракция на мрна mrna количествено синтезиране на cdna Количествени PCR в реално време изчисления на Western blot и статистически методи Резултати Установяване на теста за лептинова резистентност Лептинова кинетика след единичен тест за резистентност на LRT ) Влияние на телмисартан върху чувствителността към лептин Влияние на лечението с телмисартан върху телесното тегло и енергийния прием Влияние на лечението с телмисартан върху плазмалептина Влияние на лечението с телмисартан върху енергийната консумация под Телмисартан Изследване на толерантността към глюкозата при продължително хранене с диета в кафенето Влияние на диетата в кафенето върху телесното тегло Консумация на храна и вода при диета в кафенето Влияние на диетата в кафенето върху телесното тегло Физическа активност Влияние на диетата на кафенето върху хемодинамиката Влияние на диетата на кафенето върху базовите метаболитни параметри Тест за толерантност към глюкоза през устата (OGTT) Тест за толерантност към инсулин (ITT) Влияние на диетата на кафенето върху оцеляването
6 Съдържание 4 Дискусия Влияние на блокадата AT 1 с телмисартан върху чувствителността на лептин Прием на енергия и консумация при CD Влияние на CD върху развитието на инсулинова резистентност Влияние на CD върху смъртността от SHR Outlook Резюме Библиография Приложение Списък на фигури Списък на таблици Вещества и закупени разтвори Рецепти на разтвори Придобити Тестови комплекти RIA комплекти Комплекти за определяне на генната експресия Консумативи Устройства Списък на съкращенията Благодарности Автобиография Публикации Плакат Публикации Награди и награди
22 Материал и методи heim, 8 mg/kg/d) или вода (H 2 O), третирани като контроли. Всички плъхове могат да избират между диетата на кафенето и стандартната диета. След десетдневна фаза на аклиматизация, плъховете бяха рандомизирани в четири групи (n = 10): TEL/лекуван SD (n = 10) TEL-третиран SD (n = 26) TEL/NaCl-третиран SD (n = 10) TEL -третирано SD (n = 6): кръвно налягане SD, обработено с H 2 O (n = 20) SD, обработено с Lep (n = 10) SD, третирано с H 2 O/NaCl (n = 10) Фиг. 3: Схема на лечение за определяне на лептинова чувствителност под телмисартан (TEL) или контрол (H 2 O) с едновременно хранене с диета от кафетерията. В последния тест за лептинова резистентност плъховете на Sprague-Dawley (SD) получават или лептин (Lep), или физиологичен разтвор (NaCl), инжектиран подкожно. Поради сложния тест за лептинова резистентност в края на проучването, животните бяха доставени изместени с една седмица, така че само 20 животни във всяка от четирите групи бяха рандомизирани (n = 5) и тестовият протокол можеше да бъде извършен аналогично, изместен за една седмица (фиг. 4)
25 Материал и методи 2.2 Приготвяне на разтвори Инсулинов разтвор Човешкият инсулин (Insuman Rapid) в доза 40 IU/ml се разрежда 1:80 с 0,9% NaCl, така че 0,5 IU/ml е 0,5 IU/kg телесно тегло интраперитонеално Разтвор на лептин (R&D системи, рекомбинантен лептин на плъх, чистота> 97%) се разтваря в 20 mm TRIS (трис (хидроксиметил) аминометан) буфер, рН 8 и се разрежда до концентрация 100 или 200 µg/ml. За тази цел първоначално е използван буферът Tris. Съответното количество Tris беше претеглено и в дестилирана вода. разтваря се, буферира се до желаната стойност на рН с 5 N NaOH и се регулира до необходимия обем с дестилирана вода. пълен до горе. Готовият разтвор се филтрира стерилно Разтвор на телмисартан Разтворът на телмисартан (Boehringer, Ingelheim) се приготвя в концентрация 8 mg/ml. Информацията се отнася за 10 ml основен разтвор. Телмисартановият прах се претегля в подходящото количество и се разтваря напълно в 2 ml 0,1 N разтвор на NaOH. 6 ml дестилирана вода. бяха добавени с пипета и титрувани с 0.1 N HCI в рН диапазон между 8.8 и 9.2. И накрая, с аква дест. до 10 ml
26 Материал и методи 2.3 Приложение на медикаменти или вещества Интраперитонеално приложение Инсулинът се прилага интраперитонеално (канюла 0,4 х 13 mm, BD Microlance) в доза 0,5 IU/kg Перорално приложение Перорално приложение на течности през фаринкса, който е бил вкаран в хранопровода след привикването на животните. 50% глюкоза и телмисартан в доза от 8 mg/kg са приложени през устата. Подкожно приложение Лептинът се инжектира в доза от 100 и 200 µg/kg в подкожната мастна тъкан, медиално до лопатката в кожна гънка, създадена за тази цел (канюла 0,4 x 13 mm, BD Microlance). 2.4 Екстракция на материал Антикоагуланти и стабилизатори Параметрите лептин, инсулин, С-пептид, глюкагон, адипонектин и кортикостерон се определят от плазмата в покрити с K-EDTA микровети (Sarstedt). Разтвор на Na-EDTA с крайна концентрация 12,1 mm се добавя към кръвта за клане, за да се изследва лептин в плазмата