Оптимизиран анализ на In Vivo и In vitro протокол за чернодробна стеатоза (преведен на френски)
Въведение
Затлъстяването е нарастващ здравословен проблем в развитите и развиващите се страни. Съобщава се, че това е едно от съпътстващите състояния, често свързани с неалкохолна мастна чернодробна болест (неалкохолна мастна чернодробна болест), с разпространение, вариращо между 30 и 100 процента при пациенти с NAFLD 1. Поради силната корелация между мастните черния дроб и затлъстяването, (DIO) модели, индуцирани от диетата на затлъстели мишки, се използват широко за изследване на сложните молекулярни механизми, свързани с развитието на NAFLD 2, 3, 4, 5, 6. Чернодробната стеатоза е първият етап на NAFLD и може да прогресира до неалкохолен стеатохепатит (NASH), цироза и в крайна сметка рак на черния дроб 7. Следователно общата цел на този метод е да се генерират животински и клетъчни модели на състоянията чернодробна стеатоза и да се предоставят подробни протоколи за ефективни и точни липиди измерване. Тези модели и измервания са полезни и за изучаване на други метаболитни нарушения, като инсулинова резистентност и диабет тип 2.
Тъй като затлъстяването се определя като един от основните рискови фактори за NHSA, диета с високо съдържание на мазнини и захароза (HFHS), имитираща диета с високо съдържание на мазнини в западен стил, се използва за предизвикване на затлъстяване при мишки. Впоследствие степента на затлъстяване на черния дроб може да бъде оценена с помощта на различни методи. Първо, телесното тегло и анализът на телесния състав с ядрено-магнитен резонанс (ЯМР) показват натрупването на липиди по време на хранене. Мастната маса и чистата маса могат да се определят количествено неинвазивно и в реално време.
Предимството на настоящия метод е използването на множество оптимизирани подходи за генериране на модели на чернодробна стеатоза и за пълна характеристика на фенотипите in vivo и in vitro. Моделите DIO на мишката могат да рекапитулират метаболитните патологии и фенотипите на човешкото мастно чернодробно заболяване. В този модел могат да бъдат възпроизведени и други метаболитни параметри при хората 8. Генерирането на модела на стеатотичния хепатоцит в отговор на висока глюкоза, колкото по-ефективен, полезен е инсулинът, и преодолява ограничението на скъпата и досадна работа. Взети заедно, тези методи са достатъчни и необходими за изследване на чернодробна липидна дисфункция и инсулинова резистентност по време на претоварване с хранителни вещества.
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Протокол
Всички експериментални протоколи за животни са одобрени от институционалния комитет за грижа и използване на животните към Института по хранителни науки, Шанхайски институти по биологични науки, Китайска академия на науките (Шанхай, Китай).
1. Модел DIO Mouse
2. Основен модел на миши хепатоцити
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Представителни резултати
Както е показано в фигура 1А, Теглото на мишката се увеличава до 45 ± 1,2 g след 16 седмици HFHS диета, което е приблизително 1,5 пъти по-високо, отколкото в групата с диета с чау. Показани са ЯМР анализи на телесния състав, показващи мастна маса и чиста маса на мишки (фигура 1Б). Разпределението на мазнините по цялото тяло и черния дроб се определя чрез ЯМР, а представителни изображения в псевдоцветни, съзнателни мишки в реално време са показани на фигура 1C-D. Телесното тегло и телесният състав бяха измерени и визуализирани по време на процеса на хранене с диетата HFHS.