Определяне на малоновия диалдехид MDA

Приготвяне на екстракт от хлороформ

Bligh E.G., Dyer W.J. // Мога. J. Biochem. Physiol - 1959 - 37 P.911

ПРИНЦИП НА МЕТОДА. Аз­методът се основава на факта, че хидрофобните липиди се екстрахират в хидрофобни­хлороформна среда и всички водоразтворими молекули преминават във фаза вода-метанол.

РАБОТЕН ПРОЦЕС. 1,35 ml дестилирана вода се излива в стъклена чаша, 0,25 ml субстрат, 4 ml метанол и 2 ml хлоро­формата. Липидите се екстрахират с магнитна бъркалка за 3 минути. След това се добавят 2 ml хлороформ и 2 ml дестилирана вода. След разделяне на слоевете (5 часа, хладилник), долният слой хлороформ се взема с помощта на спринцовка с дълга игла, в която се определят общите липиди, диенови конюгати.

Експресна вариация. След добавяне на хлороформ и обезводняване, изсипете пробата в епруветка за центрофуга и я поставете във фризер за 30 минути или повече. След това се центрофугира (5-10 мин 3000 об/мин) - настъпва фазово разделяне. Изберете долната фаза на хлороформ.

Дефиницията на Шиф за основите на SHO

ПРИНЦИП НА МЕТОДА. ICO имат хромоформни системи с максимум на възбуждане при λ = 360 nm и максимум на флуоресценция при λ = 440 nm

Хинин сулфат (стандартен) 1 mg/ml (10 mg в 10 ml ди-вода)

1 ml екстракт от хлороформ. Измерете флуоресценцията на спектрофлуориметър λ exc = 360 nm; λ емисия = 440 nm

Празно: Хлороформ

Стандартна проба: хинин сулфат при същия λ

Съдържанието на SHO се изразява в произволни единици (относителни единици флуоресценция p.u.f.), намалени до общи липиди

SHO [o.e.f./mg OL] =, където

---