Методи за преброяване на броя на ретикулоцитите
1. Преброяване на броя на ретикулоцитите в намазка след оцветяването им със специални багрила.
2. Преброяване на броя на ретикулоцитите с помощта на флуоресцентна микроскопия.
3. Автоматично преброяване на броя на ретикулоцитите с помощта на хематологичен анализатор.
В повечето домашни лаборатории ретикулоцитите се отчитат в намазка след оцветяването им със специални багрила. Този метод е прост, икономичен, не изисква специално скъпо оборудване и поради това може да се използва във всяка лаборатория за клинична диагностика.
Вторият и третият метод за преброяване на ретикулоцитите също са доста прости, но много по-скъпи от икономическа гледна точка - те изискват скъпо оборудване (флуоресцентен микроскоп и хематологичен анализатор, който отчита ретикулоцитите) и реагенти и поради това могат да се използват само в някои лаборатории.
Определянето на броя на ретикулоцитите се извършва чрез микроскопия на специално оцветени цитонамазки.
Стандартизиран метод за преброяване на броя на ретикулоцитите след оцветяването им с брилянтно крезилово синьо, лазурно I или лазурно II директно върху стъкло или в епруветка (1972).
- Принцип. Суправитално оцветяване с оцветители, които разкриват гранулирано-нишковидното вещество на ретикулоцитите.
- Реактиви. Може да се използва едно от следните оцветители.
1. Наситен разтвор на брилянтно крезилово синьо в абсолютен алкохол (за приготвяне на абсолютен алкохол е необходимо да издържите 96% етанол при няколко промени на калциниран меден сулфатен прах) За 100 ml абсолютен алкохол вземете 1,2 g боя.
2. Разтвор на лазурен I, предложен от П. Н. Кориков: лазурен 1 - 1 g, амониев оксалат - 0,4 g, натриев хлорид - 0,8 g, етилов алкохол 96% 10 ml, дестилирана вода - 90 ml. Разтвор от боя в затворена бутилка се поставя за 2-3 дни в термостат при 37 ° С и периодично енергично се разклаща. След това се охлажда до стайна температура и се филтрира през хартиен филтър. Разтворът се съхранява в контейнер от тъмно стъкло. Ако се появи утайка, боята трябва да се филтрира отново.
3. Разтвор на лазур II от следния състав: лазур II 1 g, натриев цитрат 5 g, натриев хлорид 0,4 g, дестилирана вода 45 ml. Разтворът се оставя в термостат при 37 ° C за 2 дни, като се разбърква от време на време. За да се ускори разтварянето, боята може да се загрее на слаб огън за 15-20 минути, без да кипи. Охлажда се до стайна температура и се филтрира). Съхранявайте в съд от тъмно стъкло.
- Специално оборудване. Микроскоп.
Рисуване върху стъкло.
Добре измитото и обезмаслено стъкло се нагрява върху пламък на горелката. Капка от едно от багрилата се нанася върху стъклото със стъклена пръчка и се приготвя намазка от боя с полирано стъкло. Страната на стъклото, върху която се нанася намазката от боя, е маркирана със стъклен рекордер. В тази форма стъклото може да се подготви за бъдеща употреба и да се съхранява на сухо и тъмно място. Поставете капка кръв върху намазка с боя, пригответе тънка намазка от нея и веднага я поставете във влажна камера за 3-4 минути (можете да използвате чаша на Петри с ролки от навлажнена памучна вата или филтърна хартия, положени по краищата ). След това изсушете циганите на въздух.
В така приготвените цитонамазки еритроцитите са оцветени в жълтеникаво-зеленикав цвят, гранулирано-нишковидното вещество - синьо.
In vitro оцветяване.