Метод за титруване на анти-бяс вирус неутрализиращи антитела, Патентна банка
Изобретението се отнася до областта на ветеринарната вирусология, по-специално до метод за титриране на неутрализиращи вируса антитела срещу бяс в кръвния серум на ваксинирани животни. Същността на метода е, че ваксината щам вирус на бяс 71 BelNIIEV-VGNKI взаимодейства с тестваните серуми, вирус-серумната реакционна смес се инкубира в продължение на 60 минути при 37 ° C, въвежда се ежедневна непокътната сайга култура на бъбречни клетки и се поставя в CO2 инкубатор с последващо определяне на 5-7 дни от титъра на вирус-неутрализиращи антитела при ограничаващо разреждане на серума, при което се наблюдава 50% потискане на цитопатичния ефект на вируса върху клетъчната култура. Техническият резултат е разработването на чувствителен, по-технологичен и икономически жизнеспособен метод за титруване на анти-бяс вирус-неутрализиращи антитела. 2 раздел.
Изобретението се отнася до областта на ветеринарната вирусология, а именно до метод за титруване на неутрализиращи антитела срещу бяс в кръвния серум на ваксинирани животни, базиран на инхибиране на цитопатичното действие (CPE) на вируса на бяс в клетъчната култура, и може да бъде използва се в изследователски институти и ветеринарни лаборатории.
Най-честият тест за определяне на анти-бяс вирус неутрализиращи антитела в кръвта на животните е реакцията на неутрализация при мишки, разработена през 1935 г. (Webster L., Dawson J. Диагностика на бяс чрез инокулация на мишки. Измерване на хуморален имунитет към бяс чрез тест за защита на мишка // Proc Soc Exp Biol Med 1935 Vol 32 P 570-573). Въпреки предимствата на този тест, доказан от времето и практиката, той има някои недостатъци: провеждането на проучването в рамките на 15-21 дни, относително скъпите разходи за животни и използването на жив вирус, което е свързано с опасност за изследовател.
В момента са разработени и приложени различни методи за in vitro титруване на антитела срещу бяс.
За проследяване на нивото на специфични антитела в кръвния серум на ваксинирани животни, по-специално се използва ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) (Nicholson KG, Prestage H. Ензимно-свързан имуносорбентен тест: Бърз възпроизводим тест за измерване на антитяло срещу бяс // J.Med. Virol. - 1982. - Vol.9, No. 1. - P.43-49; Smith JS, Karamany RM, Kazar J., Malik SA, Badriya M. Бърз количествен анализ на бяс антитела след ваксинация чрез ELISA // APMIS. - 1988. - Vol.96, No 3. - P.40-43.; Botvinkin AD Откриване на антитела срещу вируса на бяс с помощта на ELISA в кръвни проби, събрани на хартиени дискове // Лаборатория . - 1988. - No 3. - С.73-75; Сазанова Е.Я., Кузнецова С.В., Маслов Е.В., Боцко А.А. Ензимен имуноанализ за индикация на вируса на бяс и определяне нивото на антителата // Ветеринарна медицина 1991. - No 8. - С.62-64). Този тест може да се извърши в практическа среда и резултатите могат да бъдат получени в рамките на няколко часа. Въпреки това, в допълнение към неутрализиращите антитела, този метод също така открива различни антитела от други видове, докато няма връзка между резултатите и данните от реакцията на неутрализация при мишки.
За определяне на вирусно-неутрализиращи антитела срещу бяс се използва тест за инхибиране на флуоресцентни огнища, извършен върху непрекъснати култури от клетки BNK-21, сайгака (PS), използвайки вируса на бяс, щамове ERA, CVS, Vnukovo-32/107, TC -80 (Zaian E. et. Al. Микротест за количествено определяне на неутрализиращи антитела срещу вируса на бяс // J. Biol. Stand. - 1979. - No. 7. - P.213-220; Lyng J. Анализ на мощността на антителата Доклад за съвместно проучване // J. Biol. Stand. - 1989. - Vol.17, No. 3. - P.267-280; Sologub TV Разработване и усъвършенстване на инструменти и методи за диагностика на бяс // дисертация. Кандидат на биологични науки. - Покров, 1993; Zavadova J. et. Al. Титруване на антитела чрез бърз тест за инхибиране на флуоресцентен фокус (RFFIT) // Veter. Med. (Praha). - 1996. - Т. 41, № 7. - P.225-230; Недосеков В. В. и др. Титруване на антитела срещу бяс с помощта на тест за инхибиране на флуоресцентен фокус // Ветеринарна медицина. - 1998. - N. 7. - 28-30 и др.).