ИЗСЛЕДВАНЕ НА РАЗВИТИЕТО И МЕТАБОЛНИТЕ ФУНКЦИИ НА ФЕТОПРОТЕИНОВИЯ ЯДРЕН РЕЦЕПТОР
ДАНИЕЛ МАЛЕНФАНТ ИЗСЛЕДВАНЕ НА РАЗВИТИЕТО И МЕТАБОЛНИТЕ ФУНКЦИИ НА ФАКТОРА ЗА ПРЕПИСВАНЕ НА ФЕТОПРОТЕИНОВ ЯДЕРЕН ПРИЕМНИК (FTF) Дисертация, представена във Факултета за докторантура и докторантура на университета Лавал като част от докторската програма по клетъчна и молекулярна философия за придобиване на докторска степен по философия (Д-р) МЕДИЦИНСКИ ФАКУЛТЕТ UNIVERSITÉ LAVAL QUÉBEC 2012 Даниел Маленфант, 2012
Предговор Бих искал да благодаря на д-р Люк Беланжер, че ми позволи да извършвам изследователската си работа в неговата лаборатория, както и за финансовата му подкрепа през цялото ми следдипломно обучение. Също така благодаря на д-р Jacques Côté и Génome Québec за финансирането на част от моите докторски изследвания. Благодарим на Ален-Роджър Батай и Ерик Пакет за прякото им участие в събирането и анализа на данните, представени в глава 3 на тази дипломна работа. Голямо благодаря на всички хора, които са работили в лабораторията на д-р Беланже по време на следдипломното ми обучение, особено на Силви Рой, Денис Алард, Фредерик Сен-Пиер, Ален Ламонтан, Джули Пулен, Шантал Курманш, Жан-Франсоа Паре и Мариев Якоб-Вагнер . Те ми дадоха както морална, така и неморална подкрепа и озариха дните ми. И накрая, благодаря на всички онези, с които играех футбол, катерех се и особено на моя екип от драконови лодки „Les Barbares de Québec“ за часове забавление и надминаване на себе си. Наистина ми харесва да съм около теб и да прокарвам границите с теб.
„Търпението и продължителността на времето са повече от сила или ярост“ -Жан Де ла Фонтен
Съдържание Резюме. i Резюме. ii Предговор. iii Съдържание. v Списък на таблици. vii Списък на фигурите. viii Списък на съкращенията. ix Глава 1 Въведение. 1 1.1 Черният дроб. 2 1.1.1 Архитектура. 2 1.1.2 Развитие. 6 1.1.3 Функции. 9 1.1.4 Чернодробни заболявания и рак. 15 1.2 Транскрипция. 18 1.2.1 Общи положения. 18 1.2.2 Регулаторни елементи. 23 1.2.3 Транскрипционни фактори. 27 1.3 Чернодробна транскрипция. 30 1.3.1 Хепатоцитен ядрен фактор (HNF). 31 1.3.2 CAAT/енхансер свързващ протеин (C/EBP). 34 1.3.3 Ядрени рецептори. 37 1.3.4 Други фактори. 43 1.4 FTF (Фетопротеинов транскрипционен фактор). 44 1.4.1 Общи положения. 44 1.4.2 Структура и дейност. 46 1.4.3 Промоутъри. 48 1.4.4 Изразяване на тъкани. 50 1.4.5 Функция. 51 1.5 Цел на докторските изследвания. 54 Глава 2 Генът на фетопротеиновия транскрипционен фактор (FTF) е от съществено значение за ембриогенезата и хомеостазата на холестерола и се регулира от елемент DR4. 56 2.1 Предговор. 57 2.2 Резюме. 57 2.3 Резюме. 58 2.4 Въведение. 59 2.5 Експериментална процедура. 60 2.5.1 Инактивиране на гена на FTF. 60 2.5.2 In Situ хибридизация. 62 2.5.3 Дейност LacZ. 62 2.5.4 Анализ на микрочипове. 63 2.5.5 Северни петна. 63 2.5.6 Количествена PCR. 63 2.5.7 Анализи за изместване на електромобилността и Scatchard. 64 2.5.8 Western Blots. 65
Списък на таблици Таблица 2.1: Генотипове на ембриони (Е, ембрионален ден) от кръстосани FTF +/- мишки. 72 Таблица 2.2: Серумни нива на холестерол при диви (+/+) и FTF-хаплоидни (+/-) мишки, хранени с контролна диета или диета с 2% холестерол в продължение на 5 дни. 73 Таблица 2.3: Анализ на микрочипове на експресия на чернодробни гени при възрастни мъжки Ftf +/- мишки. 75 Таблица 3.1: Целеви гени на FTF, свързани с митохондрия в черен дроб на възрастна мишка. 98 Таблица 3.2: Потенциални транскрипционни партньори на FTF. 99
xv TR тиреоиден рецептор TRE елемент на щитовидната жлеза отговор trna трансфер РНК TSS начална страница на транскрипция UTP уридин трифосфат UTR нетранслиран регион VDAC1 зависим от напрежението анион канал 1 VDR витамин D рецептор (NR1I1) (витамин D рецептор) VLDL много ниска плътност липопротеин (много ниска плътност липопротеин) w/v тегло/обем (тегло/обем) WNT безкрил тип MMTV сайт за интеграция семейство wt див тип (сова) X-gal 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-бета-D-галактопиранозид XRCC5 ATP- зависима ДНК хеликаза II (рентгеново възстановяване, допълващо дефектното възстановяване в клетки на китайски хамстер 5)
Глава 1 Въведение
4 Фигура 1.1: Морфология на черния дроб. Център: обща анатомия на човешкия черен дроб. Вложки: A) Чернодробна лобула B) Съдови и жлъчни системи: 1- Клон на порталната вена; 2- Клон на чернодробната артерия; 3- Жлъчен канал; 4- Ограничителна плоча; 5- Центробуларна вена; 6- Чернодробни клетъчни стени; 7- синусоиди; Розова стрелка: приток на кръв; Зелена стрелка: поток на жлъчката (между кутиите); Кутия: 8- жлъчен канал; 9- Херинг канал; 10- Жлъчен канал В) Синусоида: 11- Звездни клетки; 12- Светлина от синусоидални капиляри; 13 - Пространство на Disse; 14- Жлъчен канал; 15- Хепатоцит; 16 - плътно кръстовище; 17- клетки на Küpffer; 18- Ендотелна клетка на чернодробни синусоиди. Адаптиран от www.embryologie.ch и наръчника на Merck за медицинска информация - второ домашно издание, онлайн версия 1.1.1.4. т.е. крайните разклонения на порталната и центробуларна вени и посоката на кръвния поток (прегледани в