Изследване на чревно възпаление в DSS-индуциран модел на IBD протокол (преведено на френски)

Обобщение

Експериментални модели на възпалителни заболявания на червата ни позволиха да изследваме вродения и адаптивен комплекс от имунни отговори, свързани с патогенезата. Използвайки хистологичен резултат, количествено определяне на провъзпалителните цитокини и активността на миелопероксидазата, може да започне да се оценяват тези отговори, наблюдавани при възпалителни заболявания на червата.

Резюме

Възпалителното заболяване на червата (IBD) обхваща редица чревни патологии, най-честите от които са улцерозен колит (UC) и болест на Crohn (CD). Както UC, така и CD, когато се намират в дебелото черво, генерират профил на подобни симптоми, които могат да включват диария, ректално кървене, коремна болка и загуба на тегло. 1 Въпреки че патогенезата на IBD остава неизвестна, тя се описва като многофакторно заболяване, което включва както генетични, така и компоненти на околната среда. 2

Има много животински модели и променливи на възпаление на дебелото черво, които приличат на няколко характеристики на IBD. Животинските модели на колит варират от тези, които възникват спонтанно при възприемчиви щамове на някои видове, до тези, изискващи прилагане на специфични концентрации на индуциращи колит химикали, като натриев декстран сулфат (DSS). Химично индуцираните модели на чревни възпаления са най-често използваните и най-добре описаните модели на IBD. Прилагането на DSS в питейна вода води до остър или хроничен колит, в зависимост от административния протокол. 3 животни, получили SSD, показват загуба на тегло и признаци на разхлабени изпражнения или диария, понякога с данни за ректално кървене 4,5. Тук описваме методите, чрез които развитието на колит и произтичащата от това възпалителна реакция могат да бъдат характеризирани след прилагане на DSS. Тези методи включват хистологичен анализ на оцветени с хематоксилин/еозин участъци на дебелото черво, измерване на провъзпалителни цитокини и определяне на миелопероксидаза (MPO), което може да се използва като маркер за възпаление. 6

Степента на възпалителния отговор в болестното състояние може да бъде оценена чрез наличието на клинични симптоми или чрез промяна на хистологията в лигавицата. Хистологичното увреждане на дебелото черво се оценява с помощта на система за оценяване, която отчита загуба на архитектурата на криптата, възпалителна клетъчна инфилтрация, мускулно разрастване, изчерпване на бокалните клетки и крипта. 7 Количествено, нивата на остри противовъзпалителни цитокини с възпалителни свойства, като интерлевкин (IL) -1β, IL-6 и фактор на туморна некроза (TNF) -α, могат да бъдат определени с помощта на класическите ELISA методи. В допълнение, MPO активността може да бъде измерена с помощта на колориметричен анализ и използвана като индекс на възпаление. 8

При експерименталния колит тежестта на заболяването често корелира с повишена MPO активност и високи нива на провъзпалителни цитокини. Тежестта на колит и възпаление, свързано с увреждане, може да бъде оценена чрез изследване на консистенцията на изпражненията и кървене, в допълнение към оценка на хистопатологичния статус на червата, като се използват оцветени с хематоксилин/еозин участъци от тъкан на дебелото черво. Фрагменти от тъкани на дебелото черво могат да се използват за определяне на MPO активност и производство на цитокини. Взети заедно, тези измервания могат да се използват за оценка на възпалителния отговор при животински модели на експериментален колит.

Протокол

1. Миши модел на остър DSS-индуциран колит

2. Вземете проби от тъкани от дебелото черво

3. Оценка на тежестта на колита

4. Подгответе стандартни разтвори за реактиви за тестване.

  1. Пригответе 50 mM разтвор на калиев фосфатен буфер, като добавите разтвор B (K 2 HPO 4, 8,7 g двуосновен калиев фосфат в 1 L dH 2 O) към разтвор A (KH 2 PO 4, 6, 8 g едноосновен калиев фосфат в 1L DH20), докато се достигне рН 6,0. Останалите разтвори могат да се съхраняват в хладилник (2-8 ° C) до бъдеща употреба.
  2. Пригответе буфери за хексадецил бромид (CCFH), като добавите 5 g HTAB в 1 L калиев фосфатен буфер (50 mM, рН = 6.0). Загрейте внимателно, за да се разтвори и съхранявайте при 2-8 ° C до употреба. Когато е необходимо, се загрява, за да се разтвори отново.
  3. Пригответе лизисен буфер за тъканна хомогенизация за протеинов анализ, като добавите 10 ml Tris-1M солна киселина (рН = 8,0), 6 ml 5M натриев хлорид и 2 ml Triton X-100 до 182 ml стерилизирана дестилирана вода. Triton X-100 е много вискозен при стайна температура и затова трябва да се затопли леко преди употреба. Приготвеният буфер за лизис може да се съхранява при -20 ° C до употреба.