Интерес от биоанализ, основан на ензимните дейности на едноклетъчните зелени водорасли за
Ензимни дейности с интересен потенциал
Алкална фосфатаза
Съществуват множество естерази (карбоксилни естерази, ацетил естерази, холестеролови естерази и др.), Които играят различни роли в метаболизма. Ензимите, използвани в тестовете, принадлежат към групата на холинестеразите. Тези ензими играят ролята на невротрансмитери при някои видове, но при растенията са демонстрирани не-невронни дейности, по-специално роля в абсорбцията на вода и фотосинтезата [5]. Интересът на тези ензими за нашето изследване е, че тяхната активност намалява в присъствието на някои видове инсектициди като карбамати или органофосфати [1,2,3]. Количественото определяне на това намаляване на активността ще даде възможност да се определи присъствието на тези пестициди във водната матрица. Активността на тези ензими е още по-интересна, тъй като изглежда нечувствителна към наличието на тежки метали [2]. Следователно този тест априори допълва този на алкалната фосфатаза. Интерес към биопробата
Използването на биоанализи, базирани на метаболизма на водораслите, има редица предимства: отговор, получен чрез използване на цели клетки (т.е. култура на водорасли без денатурация) на организъм, представителен за основата на водните трофики, бърз резултат, отговор на смес от разнообразен състав, включващ бионаличността на замърсителите, синергичните или антагонистични ефекти на различните съставки. Този отговор обаче остава качествен. Настоящата цел е да се оцени интересът на биоанализите, базирани на метаболизма на водораслите, за да се позволи откриването на замърсители в сложна матрица (например в случаите на градски зауствания) и по този начин да се направят икономии от мащаба по отношение на физико-химичните анализи.
Експерименти върху бури на брегове (DO)
Учебни сайтове
DO, избрани за това проучване, бяха избрани според няколко критерия: достъпност на заустването, тип мрежа (унитарна, отделна) или околна среда (земеползване, урбанизация и др.).
Измервания на метаболитна активност
Водораслите Chlorella vulgaris се отглеждат в среда, приготвена съгласно AFNOR T90-304 стандарт [6]. Тези среди позволяват да се задоволят всички хранителни нужди, необходими за растежа на водораслите. Културите се обновяват през цялата година, като се използва редовно разсаждане (честота: на всеки 10-15 дни). За да се получи максимална активност на алкална фосфатаза, е необходимо водораслите да изчерпят целия си вътрешен фосфор. Следователно водораслите в среда AFNOR се субкултивират във фазата на експоненциален растеж в среда AFNOR без фосфат. Този етап се нарича глад и продължава 21 дни. Трансплантацията на водорасли се извършва при стерилни условия, като се използва качулка с ламинарен поток и бунзенова горелка. След това водораслите се поставят с разбъркване в тъмна стая, климатизирана при 20 ° C при осветление с интензитет на светлината, зададен на 5000 lux.