Етапи на полимеразната верижна реакция

PCR анализът (PCR диагностика) започва със събирането на материал за изследване от гинеколог, уролог или дерматовенеролог. Качеството, надеждността на резултатите, получени впоследствие, се гарантира от най-високата квалификация и богатия опит на лекарите от медицинския център Euromedprestige, които спазват всички необходими правила за провеждане на PCR анализ: пълна стерилност, използване на изключително еднократни материали.

Взетият от четката материал се поставя в съд с физиологичен разтвор. След събирането пробите трябва да бъдат доставени в лабораторията за PCR възможно най-скоро.

PCR анализът в лабораторията се провежда на три етапа:

  1. Изолиране на ДНК
  2. Амплификация на ДНК фрагменти
  3. Откриване на продукти за амплификация на ДНК

Изолирането на ДНК е началният етап на PCR диагностиката, чиято същност е следната: лекарят взема материал от пациента за изследване и го подлага на специална обработка. По време на обработката двойната спирала на ДНК се разделя на отделни нишки. Към материала на пациента се добавя специална течност, която разтваря органични вещества, които пречат на „чистотата“ на реакцията. Това премахва липидите, аминокиселините, пептидите, въглехидратите, протеините и полизахаридите. В резултат на това се образува ДНК или РНК.

Принципът на метода PCR е да "изгради" нови ДНК или РНК инфекции. Това не може да стане без премахване на клетъчен материал.

Количеството време, отделено за екстракция на ДНК, зависи от инфекциозния агент и вида на материала, използван за PCR изследването. Например отнема 1,5-2 часа, за да се подготви кръвта за следващата стъпка.

ДНК амплификация

За да извършат следващия етап от ДНК диагностиката - амплификация на ДНК - лекарите използват така наречените ДНК шаблони - ДНК молекули на инфекции, в които впоследствие ДНК ще бъдат „клонирани“. Вече беше споменато, че присъствието на пълната ДНК на инфекцията не е необходимо, за този етап е достатъчно малко парче от ДНК молекулата, което е присъщо само на този микроб (инфекция).

В основата на амплификацията на ДНК и съответно в основата на целия принцип на PCR реакцията е естественият процес на завършване на ДНК за всички живи същества - репликация на ДНК, която се извършва чрез удвояване на една ДНК верига.

Започвайки с единичен ДНК фрагмент, лаборантът го копира и увеличава броя на копията в режим на верижна реакция: след първия цикъл вече имате 2 фрагмента, след втория цикъл - 4, след третия - 8, след четвъртия - 16, след това 32, 64, 128, 256. С всеки цикъл се удвоява броят на копията и след двадесет цикъла броят вече е в милиони, а след тридесет - в милиарди. Цикълът продължава няколко минути и се свежда до определена промяна в температурата в много малък химически реактор. Всички необходими компоненти на синтеза са в разтвор тук в достатъчни количества, на първо място, нуклеотиди A, G, T и C, а също така бяха извършени фини подготвителни химически операции, така че точно копие беше незабавно отстранено от всяко готово парче ДНК, след това от това копие - отново копие, това е разклонената верижна реакция.