Ембрионирано пилешко яйце - биология
Колко горещо е твърде горещо за живота дълбоко под дъното на океана?
Антибиотици от бактерии
Клетъчна миграция: новооткрита функция на известен протеин
Молекулярен компас за подравняване на клетките
Какво кара листата да стареят през есента
Демокрацията на лешоядите токачки
Околната среда на Ekembo: Хората също живееха в открити пейзажи
| Генетика | Земеделие, горско стопанство и животновъдство
Сортът пшеница е създаден чрез кръстосване на диви треви
Колко горещо е твърде горещо за живота дълбоко под дъното на океана?
Ембрионирано пилешко яйце
Техника на зародишното пилешко яйце
Само пилешки яйца от инфекциозно контролирани популации пилета се използват за размножаване на вируси, тъй като ембрионът не трябва да бъде предварително заразен с естествени патогени, които причиняват пилешки заболявания. Тези яйца също се наричат посочен без патоген (SPF яйца). За да се получи подходящ размер на ембриона, оплодените пилешки яйца се инкубират допълнително в специални инкубатори за 5 до 14 дни при 38 ° C и относителна влажност от 60%, в зависимост от избраната по-късно техника на заразяване. Тези кувьози имат и обръщащо устройство, което редовно премества яйцата. Със специален флуоресцентен екран може да се наблюдава развитието на ембриона след отстраняване на яйцеклетките („прозрачни“), сортиране на мъртви или неоплодени яйцеклетки.
Инокулация на придатъчните органи
Обикновено се инокулира не самият ембрион, а неговите придатъчни органи. В зависимост от вирусния вид или проблем (размножаване или откриване на вируси) това са жълтъчната торбичка, амнионът, алантоисът или хорионната алантоисна мембрана (CAM). Тъй като те показват оптимален размер за инокулация и чувствителност към вируси по различно време по време на ембрионалното развитие, продължителността на времето на инкубация за използваните яйца също е различна. Най-доброто време за инфекции на жълтъчната торбичка е 5 до 7 дни след оплождането, за амнион и алантоис 10 дни, за САМ 11 до 12 дни. Ако инокулацията се осъществи твърде рано, апендиксният орган не е достатъчно голям, ако се осъществи твърде късно, все по-инхибиращите влияния на имунната защита (включително образуването на имуноглобулин Y) или намаляващата чувствителност на органите могат да предотвратят успешна инфекция.
Инокулацията се извършва при стерилни условия, за да се избегне бактериално замърсяване. След дезинфекция, черупката на яйцата се отваря с малък перфоратор. Когато CAM се инокулира, това става от страната на яйцеклетката, върху която ембрионът лежи отвътре; във всички останали придатъчни органи се отваря тъп яйцеклетката. Около 0,1 до 0,2 ml течност, съдържаща вирус (инокулум) се инжектира в съответната структура с помощта на канюла. След това купата се затваря с лепило или восък. След един ден допълнителна инкубация, яйцата се проверяват с леко устройство и мъртвите ембриони се сортират като вреда от инокулация. След още 1 до 6 дни, репликираните вируси могат да бъдат получени от алантоисната или околоплодната течност (яйчен белтък) или от мембраната на САМ и жълтъчната торбичка. Преди това яйцето се съхранява през нощта при 4 ° C, така че ембрионът да умре и кръвоносните съдове да се свият. Обикновено следват следващи етапи на пречистване, като филтриране или ултрацентрифугиране, за да се получат възможно най-чисти вирусни препарати.
Оценка на развитието на ембриона
Инокулираните яйца се рентгенови рентгенови снимки, обикновено ежедневно, и се оценява състоянието на развитие на ембриона. Ако бактериалното замърсяване и вредата от инокулация са изключени, смъртта на ембриона може да означава репликация на вируса, това може да се наблюдава, например, след инокулиране на жълтъчната торбичка с вируси на херпес симплекс. Други макроскопски видими признаци на репликация на вируса са увеличените съдови белези в ембриона, признаци на възпаление, петехиално кървене или малформации. Когато се ваксинират с вируси на едра шарка, вируси на херпес симплекс и вирус на саркома Rous, на CAM настъпват тъмни, петнисти промени, т.нар. "Покове". Те са толкова характерни, че могат да се използват за поставяне на диагноза при откриване на вирус. В повечето случаи следват различни допълнителни изследвания за идентифициране на патогена, например електронно микроскопско изследване, тест за хемаглутинация или директно откриване на вирусни компоненти (антигени и нуклеинова киселина) за прецизно типизиране.
Значение в диагностиката на вируси
Значението на ембрионираното кокоше яйце за изолиране на вируси и диагностика на вируса е ограничено, в случая на човешки вируси то вече е ограничено до изолирането и типизирането на грипните вируси. При изолирането на неизвестни, нови патогени, в допълнение към молекулярните методи, клетъчната култура и електронната микроскопия се използват и ембрионирани кокоши яйца. Във ветеринарната медицина в яйчната култура се отглеждат редица патогени, включително представители на вирусите на едра шарка, ортомиксовируси, херпесни вируси, тогавируси и различни птичи вируси. Следващата таблица дава преглед на най-важните патогени и тяхното поведение в зародишни кокоши яйца. Някои вируси могат да се размножават успешно и с приемлив добив в кокошите яйца само ако дивият тип е адаптиран към кокошето яйце през няколко пасажа (слепи пасажи).
Производство на ваксини в зародишното кокоше яйце
Голямото предимство на репликацията на вируса в зародишни кокоши яйца е високият добив на вируса. Това се използва при производството на различни ваксини още през 60-те години, например за получаване на достатъчно суровина за мъртви ваксини (разделени ваксини) срещу вируса на морбили и различни грипни вируси. Особено при последните, размножаването в клетъчните култури все още не е достигнало достатъчно високи концентрации на вируси, така че зародишното кокоше яйце все още определя индустриалното производство на грипни ваксини и до днес. Проблемът с този метод обаче е трудоемкото почистване на яйчния материал, който винаги оставя следи от яйчни протеини и следователно не може да се прилага, ако има алергия към пилешки протеин.