Ефекти от обучението по невродермит на Gießen върху състоянието на кожата и стреса - PDF Безплатно изтегляне
Ефекти от обучението по невродермит на Gießen върху състоянието на кожата и преживяването на стрес Инаугурационна дисертация за придобиване на степен на доктор от медицинския отдел на университета Justus Liebig Gießen, представена от Michael Hartmut Schock от Gießen Gießen 2017
От Медицински център по психоневроимунология Клиника по психосоматика Директор: Унив.-проф. Д-р мед. Kruse от университета Justus Liebig Giessen Рецензент: Рецензент: проф. Д-р мед. Ева Питърс проф. Д-р мед. Ден на диспута на Тило Якоб: 07.08.2018
2.8.3 ИЗМЕРВАНИЯ НА ELISA (ИНМУНАСАЙЗ, СВЪРЗАН С ЕНЗИМ) 31 2.8.4 FACS (ФЛУОРЕСЦЕНЦИОННО АКТИВИРАНО КЛЕТКО СОРТИРАНЕ) 32 2.9 МЕТОДИ ЗА СЪБИРАНЕ И ИЗМЕРВАНЕ НА ДАННИ 37 2.9.1 ЛАБОРАТОРНИ МАТЕРИАЛНИ ИЗПИТВАНИЯ 37 2.9.2 ИЗМЕРВАНИЯ ЗА ИЗПИТВАНЕ 2.9.4 ИЗМЕРВАНИЯ НА FAC 46 2.10 СТАТИСТИКА 49 2.10.1 УПРАВЛЕНИЕ НА ДАННИ 49 2.10.2 ФОРМА НА АНАЛИЗ И РЕЗЮМЕ НА ПРОБАТА 49 2.10.3 ОПИСАТЕЛЕН АНАЛИЗ 50 2.10.4 СТАТИСТИЧЕСКА ОЦЕНКА 50 3 РЕЗУЛТАТИ 52 3.1 ОСНОВНИ ДАННИ 52 3.2 РЕЗУЛТАТИ ОТ РАЗСЛЕДВАНЕТО 53 3.2.2 ВЪПРОСНИК 54 3.2.3 КОРТИЗОЛ, BDNF, SLURP-1 И IGE 58 3.2.4 ИМУНСТАТ 60 3.2.5 Т-РЕГУЛАТОРЕН ЛИМФОЦИТ 62 3.2.6 ДЕНДРИТНИ КЛЕТКИ 64 3.3 НЕОЧАКВАНИ СЪБИТИЯ 66 4 ДИСКУСИЯ 67 4.1 ОБСЪЖДАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ 67 4.1 .1 СЪСТОЯНИЕТО НА ПОЛУЧАВАНЕТО НА КОЖАТА ПО УСЛОВИЯТА НА ОБУЧЕНИЕ 67 4.1.2 НАМАЛЕНА ТРЕВОГА ПО ЗНАЧИТЕЛНИ ОТПАДЪЦИ НА СТОЙНОСТИТЕ STAI-X1 68 4.1.3 БЕЗ ПРОМЕНИ В СТРЕСА И МЕТАЛНИТЕ СРЕДСТВА 70 4.1.4 МАЛКИ ПРОМЕНИ В СЕРУМНИЯТ КОНЦОНЦ СРЕДНИТЕ МЕДИАТОРИ 71 4.1.5 АНАЛИЗИТЕ НА FACS ПОКАЗВАТ ПРОМЕНИ В НАСЕЛЕНИЯТА НА МОНОЦИТИТЕ И Т-ПАМЕТНИТЕ КЛЕТКИ 75 4.2 ОГРАНИЧЕНИЯ НА РАБОТАТА 79
4.3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 83 4.4 ПЕРСПЕКТИВИ ЗА НЕОТГОВОРНИ И НОВИ ВЪПРОСИ 85 5 РЕЗЮМЕ 87 6 РЕЗЮМЕ 88 7 СПИСЪК НА СЪКРАЩЕНИЯТА 89 8 СПИСЪК НА ФИГУРИТЕ 91 9 СПИСЪК НА ТАБЛИЦИТЕ 92 10 ПРИЛОЖЕНИЯ 114 11.1 РЕФЕРЕНЦИЯ
Въведение 1.5 Въпрос на настоящата работа Целта на представената работа беше да се оцени влиянието на програмата за обучение на Giessen върху хода на AD от психоневроимунологична гледна точка. За тази цел трябва да се отговори на следните въпроси: Посещаването на обучителен курс клинично ли намалява активността на атопичния дерматит? o Падат ли стойностите на оценката на възпалителната активност на кожата SCORAD? Могат ли да се намерят промени в самоотчетите на участниците по отношение на преживяването на стрес, справянето със стреса и психическото и физическото здраве? o Има ли съществени промени в качеството на живот и сърбеж? o Има ли промени в чувствата на стрес и безпокойство? o Променя ли се психомоторното поведение? o Има ли промени във възприемането на здравето и тенденцията към соматизиране? Могат ли да се определят промените в нивата на медиатора на стреса на кортизол, BDNF, SLURP-1 и IgE? Има ли промени в клетъчните популации на моноцитите, Т-регулаторните клетки или дендритните клетки? 23.
Методология 2.7 Курс на проучването Планирането на изследването започна на 24 декември 2014 г. След като молбата за етика беше одобрена на 21 януари 2016 г., набирането започна. Обучителните курсове се провеждаха в Гисен средно пет пъти годишно, с брой участници между 6 и 10 души. От тях обикновено могат да бъдат вербувани между 6 и 8 души, така че набирането и събирането на кръвни проби отнема добра година. Повишени проценти на отпадане настъпиха в началото, проблем, който е обсъден заедно с решенията му в раздел 4.2. Набирането на контролни групи беше по-малко проблематично, по-голямата част идваше директно от Гисен, така че по-дългите пътувания не бяха проблем. Към този момент информационната система и надбавката за разходи бяха напълно установени. След това измерванията Elisa и FACS бяха извършени за относително кратък период от няколко седмици, за да се сведат до минимум външните влияния, причинени от колебания в температурата и влажността. Броят на n = 40 субекта на рамо на изследване, насочени в протокола на изследването, не може да бъде постигнат поради високия процент на отпадане. Оценката беше проведена с 55 тествани лица. 27
Метод, при който клетките с желаните антитела се измерват отделно от другите клетки и се определя техният брой. За да се калибрират измерванията, в началото се прави компенсационно измерване. Антителата, маркирани с багрилата, се нанасят върху изкуствени носители за измерване, така наречените топчета, съответстващи на клетките, и се измерва тяхната абсорбция на светлина. По този начин могат да бъдат определени зоните за портите, описани по-горе в текста. Освен това всяко измерване изисква отрицателен контрол, изотип. Това маркирано с багрило антитяло се свързва неспецифично с всички клетки и се сравнява с по-късните резултати от измерванията. Това е, за да се гарантира, че целевите клетки могат да бъдат правилно идентифицирани. По-нататък се обясняват стратегиите за строеж на целевите клетъчни популации с помощта на диаграми. Въз основа на портите, образувани от спектрите на лазера, белязаните с антитела клетки могат да бъдат специално избрани. Резултатите са показани в проценти от клетките спрямо общото количество в предишната група (концентрация на майката). 33
Методология 2.8.4.1 Имунен статус с популации от моноцити и естествени клетки убийци Всички събития Клетъчни остатъци FSC> 20 P1 Живи клетки Апопт. Клетки 7-AAD Витални клетки CD3 + CD19- CD3- CD19 + CD16 + CD56 + CD3 + CD4 + CD3 + CD19 + Т клетки B клетки NK клетки T- помощни клетки afterrα7 + afterrα7 + afterrα7 + afterrα7 + натрупани e клетки afterrα7 + T клетки afterrα7 + B клетки afterrα7 + B клетки Клетки nachrα7 + Th клетки CD14 + CD16 + моноцити nachrα7 + nachrα7 + моноцити Класически моноцити CD14 ++ CD16- междинни моноцити CD14 ++ CD16 + CD14 + CD16 ++ некласически моноцити Фигура 3: Стратегия за измерване на имунния статус 34
Методология 2.8.4.2 Т-регулаторни клетки и свързани с тях събития Клетъчни остатъци FSC> 20 живи клетки Други клетки CD3- CD3 + Т-лимфоцити CD8 + CD4 + Т-супресорни клетки T-помощни клетки CD45RA + CCR4- CD45RA- CCR4 + CD4 + CD25 + Наивни T-помощни клетки Act.T- Помощни клетки CD4 + Т-регулаторни лимфоцити CD127lo CD25 + FoxP3 + FoxP3 + T-reg. Лимфоцити Други FoxP3- CD127lo Т-регулаторни лимфоцити CD45RA + CCR4- CD127lo наивен Т-регулатор. Лимфоцити CD45RA- CCR4 + CD127lo Т-регулаторни клетки на паметта Фигура 4: Стратегия за измерване на популациите на Т-регулаторните лимфоцити 35
Методология 2.8.4.3 Миелоидни и плазмоцитоидни дендритни клетки Всички събития Клетъчни остатъци FSC> 20 живи клетки Апопт. Клетки 7-AAD Витални клетки Моноцити В клетки CD14 + CD19- CD14- CD19 + CD14- CD19- Немоно-не-В- клетки CD304 + CD11c + CD1c + CD11c + CD141 + CD11c + pdc mdc1 mdc2 CD86 + CD86- CD86 + CD86- CD86 + CD86- Наивен pdc акт. Mdc1 Наивен mdc1 акт. Mdc2 Наивен mdc2 Фигура 5: Стратегия на затваряне за идентификация на дендритните клетки 36
Използва се методология Dunn-Bonferroni тест, който използва сдвоени сравнения на средни стойности, за да предостави информация за значителни разлики между отделните дати на изследване на групите. Статистиката на теста на Фридман се дава като Q, статистиката на теста на Дън-Бонферони като z. Размерът на ефекта от post-hoc тестването се обозначава с коефициента на корелация r според Pearson. Предполага се, че вероятностите за грешка от р 0,05 са значителни, р 0,01 като силно значими и се приема тенденция между р 0,051 и р 0,098. Във всяка фигура средните стойности на групите бяха показани със стандартни грешки и * се счита за значима и ** е силно значима. 51
Резултати 3 Резултати 3.1 Основни данни По време на писането на дисертацията в изследването са участвали 85 тествани лица; 14 мъже и 41 жени със средна възраст 31 години могат да бъдат включени в оценката на резултатите. С кръстосаните таблици и теста Chi² могат да бъдат изключени значителни разлики в разпределението на пола. Разпределенията на индекса на телесна маса (ИТМ) и нивото на образование бяха изследвани чрез тест за хомогенност на дисперсиите и еднопосочна ANOVA. И тук нямаше съществени разлики. Таблица 12: Основни данни за всички участници в проучването и тяхното разпределение по различните групи (информация в средна стойност (MW) и стандартно отклонение (SD)) Цялостна тренировъчна група (SND) Контролна група AD (KND) Контролна група здрава (KO) Резултат от статистиката. Тестване на участници, включително отпаднали 85 45 20 20 Участниците включват 55 16 19 20 Пол (мъже/жени), общо в% 14 (25,5)/41 (74,5) 3 (18,8)/13 (81, 2) 5 (26,3)/14 (73,7) 6 (30)/14 (70) χ² (1) = 0,559, точно p = 0,391 Възраст BMI MW SD MW SD 30,83 33,63 29, 53 29,85 11,2 14,19 9,98 9,53 23,41 23,05 24,47 22,71 4,38 4,34 4,83 3,98 Levene p = 0,192 F (1,53) = 0,242, p = 0,624 Levene p = 0,684 F (1,53) = 0,827, p = 0,137 52
Резултати 3.2 Резултати от проучването 3.2.1 Първичен целеви параметър SCORAD Основният целеви параметър за оценка на успеха на обучението беше ходът на SCORAD за период от 3 месеца. Тестът на Фридман показа значителни групови разлики в групата на SND (Q (2) = 15,5; p