Демонстрационен архивен файл за околна среда - Насоки 67548EWG за сближаване на правните и

Б.32. 1-ви метод

Б.32. 1.1. Въведение

Вижте общото въведение част Б

Б.32. 1.2. Дефиниции

Вижте общото въведение част Б

Б.32. 1.3. Референтни вещества

Б.32. 1.4. Принцип на метода

Тестваното вещество обикновено се прилага на тестваните животински групи 7 дни в седмицата за по-голяма част от жизнения цикъл, като се използва подходящ начин на приложение, една доза на група. По време на и след излагане, изпитваните животни се наблюдават ежедневно за признаци на интоксикация, по-специално за развитие на тумори

Б.32. 1.5. Критерии за качество

Б.32. 1.6. Описание на метода

Преди началото на експеримента животните се аклиматизират за период от поне 5 дни при експериментални условия на отглеждане и хранене. Преди началото на експеримента здравите млади животни се рандомизират и се разпределят към необходимия брой групи за лечение и контрол.

Предпочитаното експериментално животно е плъхът. Въпреки това, други животински видове (гризачи или негризачи) могат да се използват въз основа на резултатите от предишни проучвания. Тестовете трябва да се извършват с млади, здрави животни от обичайни лабораторни щамове животни; приложението на изпитваното вещество трябва да започне подходящ период след отбиването от майката.

В началото на експеримента променливостта на телесното тегло на животните не трябва да бъде повече от ± 20% от средната стойност. Ако определянето на субхронична орална токсичност предшества дългосрочно проучване, и в двата случая трябва да се използват едни и същи животински видове или тествани животински щамове.

Брой и пол

При гризачи трябва да се използват поне 100 животни (50 женски и 50 мъжки) за всяка доза и съответната контролна група. Женските не трябва нито да са в боклук, нито да са бременни. Ако животните трябва да бъдат убити в хода на експеримента, общият брой животни трябва да бъде увеличен с броя на животните, които трябва да бъдат убити преди края на експеримента.

Дозировки и честота на експозиция

Трябва да се използват поне три дозови групи и допълнителна контролна група. Най-високата доза трябва да бъде избрана така, че да се появят само незначителни симптоми на интоксикация, като забавено наддаване на телесно тегло (по-малко от 10%). Въпреки това, нормалната продължителност на живота на животните не трябва да се влияе от никакви последствия, различни от свързаните с тумора последствия.

Най-ниската доза не трябва да засяга нормалния ход на растеж и развитие или продължителността на живота на животните и не трябва да предизвиква признаци на токсични ефекти. Обикновено трябва да бъде не по-малко от 10 процента от най-високата доза.

Средната доза е между най-високата и най-ниската доза.

При избора на дозировките трябва да се вземат предвид данните от предишни експерименти.

Излагането обикновено е ежедневно. Ако веществото се прилага в питейна вода или се смесва с фуража, водата или фуражът трябва да са достъпни по всяко време за животните.

С изключение на излагането на изпитваното вещество, контролната група трябва да отговаря на експерименталните животински групи във всички отношения.

При специални условия, напр. Когато използвате аерозол в проучвания за инхалация или емулгатор с неизвестни биологични ефекти при проучвания за орална токсичност, препоръчваме да се използва допълнителна, нелекувана контролна група, на която превозното средство не трябва да се прилага.

Използват се главно перорално, дермално и инхалационно приложение. Изборът на начин на приложение зависи от физичните и химичните свойства на изпитваното вещество и вида на експозицията на човека.

Ако изпитваното вещество се абсорбира от стомашно-чревния тракт и е възможна експозиция при хора по орален път, трябва да се избере перорален път на приложение, при условие че няма противопоказания. Тестваното вещество трябва да се прилага на животните във фуража, разтворено в питейната вода или в капсули.

Ежедневното приложение през 7 дни от седмицата е желателно, тъй като при петдневен ритъм по време на периода без приложение е възможно възстановяване или намаляване на симптомите на интоксикация и по този начин може да повлияе на резултата и оценката. От практически съображения обаче петдневният цикъл на приложение се счита за приемлив.

Кожната експозиция чрез прилагане върху кожата може да бъде избрана, за да симулира един от основните начини на експозиция при хората; той също така служи като модел за предизвикване на кожни промени.

Тъй като проучванията за приложение на инхалацията създават по-големи технически проблеми в сравнение с други начини на приложение, тук трябва да се дадат по-подробни инструкции. Трябва да се отбележи, че интратрахеалната инстилация е валидна алтернатива в специални случаи.

В случай на продължителни експозиции обикновено се приема за основа предполагаемо излагане на хора, след което животните се излагат 6 часа на ден в продължение на 5 дни при еднаква концентрация на тестовата камера (периодично излагане). Или се предполага възможна експозиция на околната среда, при която животните са изложени на изпитваното вещество в продължение на 22 до 24 часа в продължение на 7 дни (продължително излагане) и е осигурен един час на ден за едновременно хранене и поддръжка на камерата. И в двата случая животните обикновено са изложени на фиксирана концентрация на изпитваното вещество. Основната разлика, която трябва да се има предвид между интермитентна и продължителна експозиция, е, че в първия случай животните могат да се възстановят от ефектите на ежедневната експозиция по време на период без експозиция 17-18 часа и по-дългия период през уикенда.

Коя от двете форми на експозиция е избрана зависи от целите на въпросното изследване и от човешките условия, които трябва да се симулират с теста. Трябва обаче да се вземат предвид някои технически трудности. Напр. Ползата от непрекъснатото излагане при симулиране на условията на околната среда се компенсира както от необходимостта от осигуряване на вода и фураж на животните, така и от необходимостта от по-сложни (и по-надеждни) аерозолни и пара техники за генериране и наблюдение.

За опитите с животни трябва да се използва система за вдишване, която позволява динамична скорост на въздуха със скорост на обмен на въздух най-малко дванадесет пъти на час, за да се осигури адекватно съдържание на кислород и равномерно разпределение на изпитваното вещество в атмосферата. Камерите за изпитване за контрола, както и за изпитваните животни трябва да бъдат еднакви по дизайн и конструкция, за да се създадат сравними условия във всяко отношение - с изключение на излагането на изпитваното вещество.

В изпитвателната камера обикновено се генерира леко отрицателно налягане, за да се предотврати изтичането на изпитваното вещество от камерата. Камерите за изпитване трябва да осигурят възможно най-малко притискане на изпитваните животни. За да се осигури стабилността на атмосферата в инхалационната камера, общият обем на изпитваните животни не трябва да надвишава 5% от обема на камерата.

Трябва да се извършат следните измервания или контроли:

По време на ежедневното наблюдение на животните, особено внимание трябва да се обърне на промените в кожата, козината, очите, лигавиците, дихателната и кръвоносната системи, автономната и централната нервна система, както и соматомоторните и поведенческите модели.

Необходимо е редовно наблюдение на животните, за да се гарантира, доколкото е възможно, броят на животните да не намалява по време на проучването поради канибализъм, автолиза на тъканите или грешки при преместването на животните. Умиращите животни трябва да бъдат отделени, убити и дисектирани.

Клиничните симптоми и смъртността трябва да бъдат регистрирани за всяко животно. Развитието на тумори трябва да се проследява с особено внимание, трябва да се запише времето на образуване, местоположение, степен, външен вид и прогресия на всеки ясно видим или осезаем тумор.

Приемът на храна (и консумацията на вода, ако изпитваното вещество се прилага с питейната вода) трябва да се определя седмично през първите 13 седмици от проучването и след това на интервали от три месеца, освен ако здравето на животните или телесното тегло изискват други мерки.

Телесното тегло на всяко животно трябва да се записва веднъж седмично през първите тринадесет седмици от теста и поне веднъж на всеки четири седмици след това.

Ако наблюдението на животните предполага влошаване на здравословното състояние по време на проучването, трябва да се направи диференциална кръвна картина на болните животни.

След 12 месеца, 18 месеца и преди жертвата се приготвя кръвна цитонамазка от всички животни. Диференциална кръвна картина се взема от животни от групата с най-висока доза и от контролната група. Ако резултатите от това, но особено от последния анализ, извършен преди убийството, или данните от патологичните изследвания го предполагат, трябва да се направи и диференциална кръвна картина за следващите по-ниски групи.

Извършва се пълна аутопсия на всички животни, включително тези, които са починали по време на експеримента или са били убити поради болест. Всички разпознаваеми тумори или тъкани със съмнителни промени трябва да бъдат запазени.

Следните органи и тъкани трябва да се съхраняват в подходяща среда за всяко по-късно хистопатологично изследване: всички забележими промени, мозък - включително тъканни участъци на медулата/моста, мозъчната и мозъчната кора, хипофизната жлеза, щитовидната/паращитовидната жлеза, тимусната тъкан, трахеята и белите дробове, сърцето, Аорта, слюнчени жлези, черен дроб, далак, бъбреци, надбъбречни жлези, панкреас, полови жлези, матка, други генитални органи, кожа, хранопровод, стомах, дванадесетопръстник, йеюнум, илеум, цекум, дебело черво, ректум, пикочен мехур, представителни лимфни възли, женска млечна жлеза, мускули на бедрото, Нерви на периферната система, гръдната кост с костен мозък, бедрената кост - включително ставната повърхност, гръбначния стълб, шията, гръдния кош и лумбалната област, очите.

Инстилацията на белите дробове и пикочния мехур с фиксиращ разтвор представлява оптималното запазване на тези тъкани; При проучвания при вдишване такъв метод на фиксиране на белите дробове е предпоставка за оптимално хистопахологично изследване. При проучвания при вдишване целият дихателен тракт, включително носа, фаринкса и ларинкса, трябва да бъде запазен.

Органите на всички животни, които умират или са убити по време на теста, както и всички животни от контролните групи и групите с високи дози се подлагат на цялостно хистопатологично изследване;
всички тумори или подозрителни промени във всички групи;
Ако има значителна разлика в честотата на неопластичните промени между групата с най-висока доза и контролната група, съответният орган или тъкан също трябва да бъдат подложени на хистопатологично изследване в другите дозови групи;
ако степента на преживяемост в групата с най-висока доза е значително по-ниска, отколкото в контролната група, следващата група с по-ниска доза трябва да бъде напълно изследвана;
Ако токсичните ефекти могат да бъдат демонстрирани в групата с най-висока доза, която може да окаже влияние върху развитието на тумора, следващата група с по-ниска доза трябва да бъде напълно проучена.

Б.32. 2. Данни

Данните трябва да бъдат обобщени в таблична форма. Това трябва да показва следната информация за всяка тестова група: броят на животните в началото на теста, броят на животните с тумори, открити по време на теста, времето на откриване и броя на животните, при които е открит тумор след аутопсията. Резултатите трябва да бъдат оценени с помощта на подходящ статистически метод. За това може да се използва признат статистически метод.

Б.32. 3. Окончателен доклад

Б.32. 3.1. доклад

Ако е възможно, в протокола от изпитването трябва да се посочи следното:

Животински видове, животински щам, произход. Жилищни условия, хранене.
Тестови условия:

Описание на апарата за експозиция

включително дизайн, тип, размери, източник на въздух, система за образуване на частици и аерозол, климатична система, обработка на отработения въздух и тип настаняване на животните в тестовата камера по време на изпълнението на тестовете. Трябва да се опишат устройствата за измерване на температура, влажност и, ако е необходимо, стабилността на концентрацията на аерозола или размера на частиците.

Тези данни трябва да бъдат обобщени в таблична форма, като се посочат средните стойности и се вземат предвид колебанията (например стандартно отклонение). Те трябва да съдържат следната информация:

Б.32. 3.2. интерпретация

Вижте общото въведение, част Б; G

Б.32. 4. Литература

Вижте общото въведение, част Б; З.

среда-онлайн - демо версия

всичко завършен Текстове в текущата версия в годишния абонамент
Такса за ползване: 90.- € нето (основен лиценз)

(в момента приблизително 7200 заглавия вижте общ преглед - без разделяне на предметни области)

Цени и поръчка

Кодът за достъп се предава в кратки срокове