Техники за пречистване на протеини; Новини-Медицински
Отказ от отговорност: Тази страница е автоматичен превод на тази страница, първоначално на английски. Моля, обърнете внимание, тъй като преводите се генерират машинно, не всички преводи ще бъдат перфектни. Този уебсайт и неговите уеб страници са предназначени за четене на английски език. Всеки превод на този сайт и неговите уеб страници може да бъде неточен и неточен, изцяло или частично. Този превод е предоставен на практика.
Техниките за протеиново инженерство са съществена част от персонализирането или производството на протеини със специфични свойства, които могат да бъдат приложени в различни индустриални процеси. Следователно те са от съществено значение за биотехнологичните изследвания.
Тези методи обаче до голяма степен зависят от възможността да се изолират и пречистят желаните протеини, така че да се разберат техните материални и химични свойства, заедно с техните третични структури и взаимодействия с лиганди и субстрати.
Интензивността, с която се продължава този процес на пречистване, зависи от употребата на протеина. Например, фармацевтичните и хранителните протеини трябва да бъдат доведени до висока степен на чистота и да преминат през няколко последователни етапа, само възможно, тъй като при всяка операция определен протеин неизбежно ще бъде унищожен.
Пречистването на протеиновите молекули е по-просто от пречистването на протеиновите съединения.
Стъпка 1: Получете суров протеинов екстракт
Суровите екстракти от вътреклетъчни протеини се приготвят чрез лизиране на клетката с помощта на химически или механични методи. След това мръсотията се отстранява чрез центрофугиране. Даването на правилен супернатант е далеч от чистата форма, като се смесва с много други макроинструкции и микромолекули.
Извънклетъчните протеини се получават чрез центрофугиране на разтвора и отстраняване на клетките. Специфичен метод за получаване на суров екстракт от термостабилните ензими е нагряването на сместа, за да се денатурират други протеини, и след това да се охлади, за да поеме термостабилните протеини от интерес, като накрая се центрофугира, за да се отстранят денатурираните протеини.
Стъпка 2: Междинно пречистване
Осоляване
След това протеините в суров екстракт се пречистват чрез утаяване от силно концентриран солен разтвор, като амониев сулфат. Това работи въз основа на по-ниската разтворимост на протеина при високи концентрации на сол. Не всички протеини обаче се утаяват при еднаква концентрация на сол, което означава, че осоляването помага и за разграждането на протеините. Може да се използва и за концентриране на протеини в разтвор. Тази операция увеличава чистотата три пъти и 92% от протеина в разтвора се възстановява.
Диализа
Протеините са големи молекули и това означава, че протеиновите соли ще се поддържат чрез преминаване на разтвора през полупропусклива мембрана. Целулозата е типична мембрана за диализа. Диализата не може да се използва за разделяне на протеини с различно молекулно тегло.
Хроматография
Други техники, използвани за отстраняване на солени външни протеини, включват хроматография и филтриране с изключване на гел. Те вече се предлагат като готови комплекти за много нормални протеини и често са подходящи за процеси с висока мощност.
Гел филтрацията действа въз основа на разделяне на размера чрез колона от порести полимерни топчета, като декстран или агароза. Големите молекули могат да преминават само през пространствата между петите, докато по-малките заемат тези две пространства и пространството вътре в петите, забавяйки ги. По този начин елуентът съдържа молекули, появяващи се по реда на техния размер, от по-големи до по-малки. Използват се и техники за хроматография с обратна фаза или йонообмен, действащи въз основа на диференциални хидрофобни свойства и съответно заряд. Хроматографията с обратна фаза може да бъде ограничена при нейното приложение поради възможна денатурация на протеина от органични разтворители.