Реакция на латексна аглутинация
Реакция на латексна аглутинация (RAL), или реакцията на латекс аглутинация, е разработена отдавна, но не е намерила широко приложение в медицината и ветеринарната медицина.
Независимо от това, нарастващата тенденция за използване на инертни синтетични материали като носители на антигени и антитела доведе до възраждане на интереса към RAL и широко проучване на възможностите за неговото приложение.
Метод принцип. Механизмът RAL е подобен на този на RIGA, който използва сенсибилизирани към антиген или антитела човешки или животински еритроцити. За определяне на RAL се използват сенсибилизирани частици от полистиролов латекс, които се слепват в присъствието на хомоложен реагент. Обикновено тази реакция протича много бързо (3 ... 8 минути), което прави възможно използването й като експресен метод за откриване на антигени и антитела.
Предимствата на RAL са, че латексовите частици, за разлика от еритроцитите, нямат кръстосано реагиращи антигени, поради което е по-специфичен от RIGA.
Материали и реактиви. един. Латекс суспензия. За приготвянето на диагностикуми обикновено се използват латексови частици с диаметър 0,81 ... 1 μm. Когато се използват по-големи частици с диаметър 0,22 ... 0,3 микрона, е трудно да се вземе предвид реакцията и технологичният процес за получаване на диагностициуми е рязко сложен, а частиците по-големи от 1 μm, въпреки че това не влияе върху активността на латексни диагностициуми, но значително увеличава честотата на неспецифични реакции.
За определяне на RAL е по-добре да се използват пречистени латекси с хомогенни частици с правилна сферична форма. Плътността на латексната суспензия обикновено е 1%, но в някои случаи може да достигне 1,3 ... 1,4%.
2. Буферни решения. За приготвяне на суспензия от чувствителни латексови частици може да се използва изотоничен разтвор на натриев хлорид, но е по-целесъобразно да се използват буферни разтвори: трис (рН 7,2 ... 8,2), трис солна киселина (рН 7,2), глицин (рН 8.2), гликолова, борат-сол и др. В този случай е желателно да се извършат предварителни тестове на системата "латекс - буфер" при експериментални условия и да се избере оптималната опция за практическа работа. Понякога в процеса на подготовка на латексния диагностик се налага да се използват няколко различни буферни разтвори.
3. Антитела. За сенсибилизиране на латексни частици са подходящи хиперимунни серуми, получени чрез имунизиране на лабораторни животни (зайци, плъхове, мишки и др.). Използването на пречистени имуноглобулинови фракции допринася за увеличаване на специфичността на RAL и намаляване на броя на фалшиво положителните и кръстосаните реакции.
Методология на изследването. Основните етапи на определяне на RAL. Понастоящем RAL обикновено се извършва върху стъклени или полистиренови плочи с търговска диагностика или лекарства. По-рядко плочи с кладенци се използват за настройка на RIGA или версия на епруветка на реакцията. Манипулациите се извършват в определена последователност.
1. Направете серия от серийни разреждания на тествания материал. Кръвният серум трябва да бъде предварително загрят за 30 минути при 56 ° C или 20 минути при 60 ° C. При задаване на RAL върху плочи за RIGA, микротитърните контури се използват при разреждане на материала. Върху плоски, равномерни плочи се нанася една капка от съответните разреждания.
2. Добавете равен обем от чувствителната латексна суспензия към всяко разреждане. Смесете 1 капка от тестовия материал и диагностикум, добавете 15, 25 или 50 μl реакционни съставки в ямките.
Когато се поставя RAL в епруветка, се използват 0,25 ml от тестовия материал и 0,05 ml (или 0,1 ml) от диагностикума.
3. Плаките се поставят на въртяща се маса или в стрелец за 3 ... 5 минути, след което се записват резултатите от реакцията.
Отчитане на резултатите. Независимо от вида на диагностикума и количеството антитела (антиген) в тествания материал, резултатите от RAL могат да бъдат взети предвид в рамките на няколко минути след смесването на реагентите. В присъствието на желания микроорганизъм в изследваната проба залепващите латексови частици образуват аглутинат, който е ясно видим с просто око. Могат да се използват лупи с ниско увеличение. При отрицателни резултати от реакцията латексовата суспензия остава хомогенно мътна, без бучки аглутинат и зони на избистряне. С ниска или ниска активност на диагностикума, както и ниска концентрация на антиген, е по-добре да се инкубират плочите при 37 ° C, което до известна степен ускорява образуването на аглутинат.