Разкриване на топография на невронни вериги в многоцветен протокол (преведено на френски)
Обобщение
Предоставяме практическо ръководство за доставяне на трасери in vivo и използването на спиноцеребеларния път като моделна система за демонстриране на основни стъпки за успешен анализ на невронни вериги при мишки. Ние детайлизираме нашия универсален протокол за проследяване, който използва аглутинин от пшеничен зародиш (WGA), конюгиран с флуорофори Alexa.
Резюме
Протокол
1. Предложете трасери in vivo, използвайки стерилна хирургия (раздели от 01.01 до 01.16)
По време на процедурата съветваме да се използват стандартни стерилни хирургични техники. Това включва използването на стерилни ръкавици, рокля и маска за лице. Инструментите трябва да бъдат или автоклавирани преди употреба, или почистени с вода и след това етанол. По време на операцията, и особено между животни, фрагменти от тъкани почистват инструментите и стерилизират инструментите на сухо със стерилизатор с гореща топка (Steri 250 Cat. # 18000-45, Fine Science Tools). Освен това е от съществено значение да организирате работното си пространство, така че да сте определили зони за подготовка на животни (бръснене и т.н.), хирургия и зона за възстановяване, където животното може лесно да бъде проверено, затоплено и снабдено с болкоуспокояващи, ако е необходимо. Ключът към оцеляването на успешните операции е да се намали рискът от инфекция и да се поддържа агресивна стратегия за следоперативни грижи. Моля, обърнете се към таблицата, където можете да намерите цялото оборудване и реактиви, необходими за този протокол.
2. Откриване на антероградно проследени мъховидни влакна
4. Микроскопия и анализ на данни
Всички проучвания върху животни са извършени съгласно IACUC протокол за животни, одобрен съгласно институционалните насоки в Медицинския колеж на Алберт Айнщайн. Мъжки и женски инбредни швейцарски мишки Webster (Taconic, Albany, NY) или инбредни мишки C57BL6J (JAX, Bar Harbor, ME) бяха поддържани в нашата колония и използвани за всички проучвания. По обяд на деня, в който е открита вагинална запушалка, се счита за ембрионален ден 0,5.
5. Представителни резултати:
Фини спиноцеребеларни аференти в ttal парасагибанди в малкия мозък (фиг. 3; Voogd et al 1969; Grishkat and Eisenman 1995; Vogel and Prittie 1994; Vig et al 2005;. Apps and Hawkes 2009; Sillitoe et al 2010; . Reeber et al (al 2011). Инжектирахме WGA-Alexa трасери в долната гръдна част на гръбначния мозък на гръбначния мозък, за да покажем: 1) че тези трасери могат да се използват за обозначаване на специфични подгрупи терминали в малкия мозък (Фиг. 3; Reeber et al 2011), 2). че WGA-Alexa трасерите са силно ярки и могат да се използват за визуализиране на цялостния модел на топографията на мъховидни влакна в цял малък мозък (фиг. 3;. Reeber et al 2011), 3), че WGA-Alexa 488 и 555 могат да бъдат използвани в комбинация за проследяване на множество пътища при едно и също животно (фиг. 4) и 4) WGA-Alexa трасерите са съвместими с имунохистохимично оцветяване (фиг. 5). В неотдавнашната работа показахме, че терминалите за проследяване на етикети на WGA-Alexa в малкия мозък още 6 часа след доставянето на проследяващи вещества в гръбначния мозък и са отличен избор за проследяване на архитектурата на пътищата на развитие (Reeber et al., 2011).
Фигура 2 Илюстрация на долната част на гърдите -. Лумбален горен гръбначен сегмент преди и след дорзална ламинектомия схематично на сегмент AT. гръбначен непокътнат от долната дърво-гръдно-горната област на гръбначния стълб на мишката Б. Дорсаламинектомия L се извършва чрез отстраняване на остисти израстъци на един или два гръбначни сегмента, след прерязване на средата между ставната ламина и остисто-гръбначния израстък.