Преодоляване на деградацията на ДНК в криминалистиката; Новини-Медицински
Отказ от отговорност: Тази страница е автоматичен превод на тази страница, първоначално на английски. Моля, обърнете внимание, тъй като преводите се генерират машинно, не всички преводи ще бъдат перфектни. Този уебсайт и неговите уеб страници са предназначени за четене на английски език. Всеки превод на този сайт и неговите уеб страници може да бъде неточен и неточен, изцяло или частично. Този превод е предоставен на практика.
Легалните образци, които са били повредени или целенасочено унищожени, трябва да бъдат поправени за анализ и използване в съда. Съществуват няколко метода, които могат да отстранят тази повреда.
Pinhead Studio | Shutterstock
Клетъчна смърт и деградация на ДНК
Клетъчната смърт активира различни вътреклетъчни ензими, като липази, протеази и нуклеази. Лизозомите, които съдържат хидролитични ензими, могат да разграждат биомолекули като хистоновите протеини. Разглобяването на хистонови протеини от своя страна улеснява действието на ендонуклеазите, които могат да разцепват ДНК.
Нуклеазите, освободени от микроорганизмите в околната среда, допълнително разграждат ДНК фрагментите, а увеличаването на свободния цитозолен калций активира фосфолипазите, които разграждат мембраната и водят до освобождаването на повече разграждащи се ензими. Така че широко разпространените увреждания на ДНК предстоят смъртна смърт.
PCR амплифицираща разградена ДНК
Въпросите относно PCR на деградиралата ДНК могат да се отдадат на три проблема: неуспех в амплификацията, преференциално усилване и неправилно кодиране на лезии. За идентифициране на къси тандемни повторни последователности (STRs) в ДНК се изисква поне 1 NG ДНК и 28-30 цикъла на амплификация.
Усилването може да бъде подобрено чрез добавяне на Taq полимераза и допълнителни цикли на PCR. В случай на деградирали проби, по-късите ампликони могат да се усилват по-често, тъй като по-дългите ампликони се деградират. Това се нарича преференциално усилване. За да се преодолее този проблем, могат да се използват меки технологии, като период на полетна масова спектрометрия или електрофоретично разделяне на микроканали.
Митохондриална ДНК (mtDNA)
Анализът на митохондриалната ДНК (mtDNA) се разглежда като алтернативна стратегия за идентифициране на геномна ДНК. Тази кръгова ДНК присъства в цитоплазмата на митохондриите и повече от едно копие на mtDNA може да присъства в митохондриите.
Повечето клетки на бозайници могат да имат 200-1700 копия на mtDNA, което го прави много полезен за разследване на деградирали групи ДНК при хората - особено за скелетни останки, включително кости, зъби и нокти.
Подобрения в методите преди PCR и PCR
За проби с по-малък брой копия се извършват многократни извличания и усилвания, за да се намалят грешките. Други методи включват намаляване на обема на PCR, увеличаване на броя на PCR цикъла, вложен PCR, усилване на целия геном преди PCR, премахване на йони след операцията на усилване или увеличаване на периода на PCR инжектиране по време на процеса на капилярна електрофореза. Друга стратегия също увеличава концентрацията на грунда. За да идентифицирате изчезнали лица или човешки останки, въведете по-нисък номер на копие.