Ефекти срещу затлъстяването на липазния инхибитор ct-ii, екстракт от ядливи билки, известен по име
Резюме
ЦЕЛ: Изследване на инхибиторните ефекти на CT-II, екстракт от Nomame Herba, върху липазната активност in vitro и върху затлъстяването при плъхове, хранени in vivo с диета с високо съдържание на мазнини.
ПРОЕКТИРАНЕ: Анализът на инхибиторния ефект на CT-II върху липазната активност се извършва чрез измерване на свободните мастни киселини, отделени след инкубация на средата с CT-II, свиня панкреатична липаза и триолеин (експеримент 1). In vivo експерименти с слаби или затлъстели плъхове (570–718 g) са хранени с високомаслена диета, съдържаща 60% мазнини със или без CT-II в продължение на 8 седмици (експеримент 2), в продължение на 14 дни (експеримент 3) или в продължение на 12 седмици. седмици (експеримент 4), съответно.
ИЗМЕРВАНЕ: промени във времето в телесното тегло, приема на храна, теглото на органите (параметрични мазнини, черен дроб, сърце и бъбреци) и плазмените параметри (триглицериди, общ холестерол, глюкоза, AST, ALT и инсулин), фекално производство на обща мазнина и общ холестерол бяха измерени. Правени са и чернодробни хистологични изследвания.
Резултати: CT-II инхибира активността на свиня липаза in vitro в зависимост от дозата (експеримент 1). Теглото на тялото и черния дроб е намалено и чернодробното хистологично изследване показва подобрение на чернодробната стеатоза при животни, лекувани с CT II (експеримент 2). CT-II значително инхибира наддаването на телесно тегло и повишаването на плазмените триглицериди по зависим от дозата начин, без да повлиява приема на храна при слаби плъхове, хранени с високомаслена диета. Повишените плазмени AST и плазмените ALT също бяха намалени (експеримент 3). Когато затлъстелите плъхове, получаващи диета с високо съдържание на мазнини, са били лекувани с CT-II до 6 месеца, първоначално е намалено телесното тегло и впоследствие наддаването на тегло е значително потиснато. Общо телесните мазнини също бяха значително намалени и се наблюдава значително намаляване на плазмените концентрации на AST и ALT (експеримент 4).
ЗАКЛЮЧЕНИЯ: Тези резултати демонстрират, че инхибиторът на CT-II липаза е ефективен за предотвратяване и подобряване на затлъстяването, чернодробната стеатоза и хипертриглицеридемия при плъхове, хранени с диета с високо съдържание на мазнини.
Достъпът е предоставен от
Въведение
Панкреатичната липаза е най-важният ензим в храносмилането на диетичните триглицериди. 1 Приложението на липазен инхибитор беше обсъдено по-рано като лечение за затлъстяване. Орлистат (Ro 18-0647), хидрогенирано производно на липстатин, получено от Streptomyces toxitricini, е мощен инхибитор на стомашната, панкреатичната и карбоксилната липаза 2 и е доказано, че е ефективен при лечението на затлъстяване при пациенти. 3, 4, 5 Изследвано е съществуването на липазни инхибитори в различни храни и се съобщава за наличието на тези инхибитори в зърнените култури, в пшеничните трици и зародиши 6 и в соята 7, 8. Инхибиторите на липазата са изследвани и в естествени продукти като китайски лекарства и различни билки. 9
Бобово растение, Cassia mimosoides L. var. номаме Макино (Nomame Herba), отглежда се в Япония и Китай и традиционно се консумира като чай в Япония. По време на скрининга на липазни инхибитори сред естествени продукти, екстрактът от Nomame Herba показа забележителен инхибиторен ефект върху липазата. В настоящото проучване се изследва инхибиращият ефект на този екстракт CT-II върху липазната активност in vitro и ефектите срещу затлъстяването при плъхове, хранени с диета с високо съдържание на мазнини in vivo.
Методите
Подготовка на CT-II
CT-II е фракция от воден етанолов екстракт от Nomame Herba, съдържаща предимно проантоцианидин (кондензиран танин). Приготвянето на фракцията е както следва: 800 g от насушената растителна въздушна част се екстрахират с 10 литра 50% етанол (4 литра, 3 литра, 3 литра, три екстракции). Екстрактът се подлага на Diaion HP 20 колона (Mitsubishi Chemical Corporation), промива се с 30% етанол и се елуира с 80% етанол. Елуираният разтвор се изпарява и лиофилизира до сухо, след което се получават 24 g CT-II прах. CT-II прах се използва като смес с експериментален режим in vivo .
In vitro инхибиторен ефект на CT-II върху липазната активност
Изследването на липазната активност с използване на триглицериди като субстрат се извършва съгласно метода на Fukumoto et al. Накратко, инхибиторният ефект на (рН 7.4) и 1 ml 50% разтвор на тетрахидрофуран (THF) CT-II се смесва в епруветка от тип L (приблизително 18 × 120 mm) и 1 ml от свинското решение. след това се добавя панкреатична липаза (Sigma тип II, 0.71 mg/ml като протеин в McIlvaine буфер) и се инкубира при 37 ° С в продължение на 15 минути с разклащане. Реакцията беше спряна чрез добавяне на етанол и освободените мастни киселини бяха титрувани с 0.05 М NaOH. Празната проба беше измерена, използвайки 50% THF без CT-II (експеримент 1).
In Vivo ефекти на CT-II върху телесното тегло, телесните мазнини и метаболитите
Животни и храна.
В това проучване са използвани женски плъхове Sprague-Dawley. Те бяха настанени в клетки от неръждаема стомана при контролирана температура (24 ± 2 ° C) и 12-часов цикъл светлина-тъмнина със свободен достъп до вода и диета с високо съдържание на мазнини на прах, съдържаща 60% мазнини, 7,5% въглехидрати, 24,5% протеини ( 6,7 kcal/g), както в предишното проучване. 11 Нормална диета, съдържаща предимно обезмаслено соево брашно и рибно брашно, се нарича екструдирана диета (CE-2, Clea Japan Inc.).
Процедури.
CT-II първоначално показва липазна инхибиторна активност в проучването in vitro. Тъй като прекомерната консумация на хранителни мазнини допринася за развитието на затлъстяване, бяха изследвани превантивните ефекти на екстракта върху развитието на затлъстяване при плъхове, хранени с високомаслена диета. След адаптиране към диетата с високо съдържание на мазнини и лабораторните условия в продължение на една седмица, постните плъхове с тегло 239 до 251 g бяха разделени на две групи. Контролната група е приемала само диета с високо съдържание на мазнини; другата диета е получила диета с високо съдържание на мазнини със смесен CT-II в концентрация от 2,5%. Теглото на тялото се измерва седмично. След 8 седмици лечение с CT-II животните бяха умъртвени, теглото на органите бяха измерени и органите бяха изследвани хистологично (експеримент 2).