Agar-Block Microcosms за контролирано разлагане на растителни тъкани по аеробни протоколи от гъби
Обобщение
Това видео показва подход за изследване на контролираната среда на разграждане на тъканите на лигноцелулозни растения от аеробни гъби. Способността да се контролират източниците на хранителни вещества и влага е едно от основните предимства на микрокосмосния агарблок, но подходът често дава смесени резултати. Разглеждаме критичните клопки за възпроизводимия добив, ниска вариабилност на резултатите.
Резюме
Тук използваме кафявото гниещо разграждащо дърво гъбичка Serpula lacrymans за разграждане на дървесината в микрокосмос блок агар, използвайки чашки на Петри с малка дълбочина на калциев агар. Тестваме ролята на екзогенните фактори за разграждането на гипса във времеви редове, за да покажем полезността и очакваната вариабилност. Единичните разкъсващи ръбове (надлъжно нарязани) блокове се пакетират, претеглят, автоклавират и асептично се въвеждат в горната пластмасова мрежа. Гъбичните инокулации са на всяко лице на блока, като към интерфейсите е добавен екзогенен гипс. Културите са асептични до последната разрушителна реколта. Тези микрокосмоси са предназначени да избягват контакт с агарови блокове или стени на Петри. Кондензацията се свежда до минимум, когато плочата се излива и по време на инкубацията. И накрая, разстоянието между инокулатите/мазилката/дървото е сведено до минимум, но без да позволява контакт. Тези по-малко технически аспекти на дизайна на агарния блок са и най-честите причини за неуспех и основният източник на променливост между проучванията. Следователно видео публикацията е полезна в този случай и ние показваме ниска вариативност и висококачествени резултати.
Протокол
Този протокол се отнася както за дървесни, така и за недървесни основи, както е отбелязано, както и за фурна или сушен материал на въздух. Прочетете първо протокола, обаче, преди настройка. Има няколко повдигнати точки, които могат да се отнасят до вашето проучване и тези точки (подчертани) изискват планиране. Имайте предвид също, че има два публикувани метода за агарни блокове, които понякога се използват, един от Британски стандарт 838 и друг след документ на Международната изследователска група за защита на дървесината (IRG-WP), представен от храбростта (1978). Нашият метод прилича на 838, с адаптации предимно в дизайна на микрокосмоса и контрола на агара, но отново и двата подхода често се избягват поради исторически проблеми с контрола на влагата в дървените блокове, причиняващи аноксия и променливост. Добър преглед на тези методи за тестване, който включва дискусии за дизайна на агарни блокове, включително стандарта 838, може да се намери в Nicholas (1973).
1) Подготовка на микрокосмоса
Микрокосмосите за тези тестове са с 1 см по-високи (по-дълбоки) от типичните чаши на Петри, което увеличава пространството за главата над дървените блокове. Те се пълнят със скромно и точно количество агар, за да се контролират абсолютните количества хранителни вещества, в допълнение към тяхната концентрация, и да се държат дървените блокове далеч (> 3 mm) от капака. Агарът, използван в този случай при тестване на гипс, е вид слаб калциев агар; ние обаче показваме представителни резултати, като използваме среда Blakeslee, средната стойност на ATCC, препоръчана за поддържане на анализа за изолиране на Serpula лакримани (Wulfen: Fries) щам Schroeter APEM 65 (ATCC 32750).
Този дизайн държи растителната тъкан далеч от контакта с агар и в безопасност от плоския капак и стените. Променливото омокряне на лигноцелулозни субстрати е основният източник на променливост в анализите на агарни блокове. Намокрянето за увеличаване на съдържанието на влага създава аноксия и потиска или дори спира аеробното биоразграждане. Също така създава проблем за всеки, който изучава окислителните механизми на гъбите от кафяво и бяло гниене, отговорни за гниещата дървесина. Кондензът върху капаците на плочата е проблем, ако водни капчици се образуват свободно и намокрят основата. По същия начин дървото и други тъкани ще „измъкват“ водата бързо от агара при контакт, което води до водно съдържание над 80% (сухо тегло. Основа) и спиране на аеробното разграждане. Тъканите трябва да се държат далеч от тези водоизточници, което позволява на нишковидната гъба да намира, свързва и контролира влагата в субстрата.
(Забележка. Разумно е, когато използвате алтернативни среди, особено с минимални хранителни агари, добавени основни соли, първо да проверите дали вашата тестова гъбичка ще расте върху нея, тъй като високите йонни сили могат да възпрепятстват растежа или дори да убият вашия изолатен тест) Използвайте преносима помощна пипета и 10 ml стерилни полистиролови пипети за асептично прехвърляне на агар в шкафа за биологична безопасност, флаконите веднъж студени. Оставянето на носителя да се охлади тук е важно, за да се сведе до минимум кондензацията. Също така подреждайте плочите високо, докато се изливат, за да намалите до минимум свободната вода върху капаците. Въпреки че кондензът е неприятност при нормалното отглеждане, той представлява основен проблем тук, ако DROs образуват Plets и намокрят дървесината. Съдържанието на влага (MC) над 80% (сухо тегло) ще създаде аноксия в тъканите, ще ограничи разграждането от аеробни гъби и ще увеличи променливостта. Изчислете MC, както следва:
MC * = [(прясно тегло х сухо тегло)/сухо тегло] x 100
2) Приготвяне на основи „Блок“